抗EV71病毒衣壳蛋白VP1卵黄抗体IgY的制备和鉴定的中期报告.docxVIP

抗EV71病毒衣壳蛋白VP1卵黄抗体IgY的制备和鉴定的中期报告 本实验旨在制备抗EV71病毒衣壳蛋白VP1卵黄抗体IgY，并对其进行鉴定。 第一步：EV71 VP1的克隆和表达 在人类恒久细胞株293T中，用pET-28a表达质粒转染的方式，将EV71 VP1克隆至表达质粒中并进行表达。 第二步：制备EV71 VP1的亲和纯化树脂 利用His-tagged蛋白亲和树脂Ni-NTA，对表达出的EV71 VP1蛋白进行亲和纯化。 第三步：制备EV71 VP1的多肽免疫原 利用EV71 VP1的氨基酸序列，设计合成了含有VP1特定氨基酸序列的多肽免疫原。 第四步：制备EV71 VP1的抗体IgY 用含有EV71 VP1多肽免疫原的蛋白A/G亲和层析纯化柱，对鸡的血清中的IgY进行亲和结合。经过多次重复处理后，制备了抗EV71 VP1的IgY抗体。 第五步：对抗体的鉴定 利用Western blotting技术，对制备的抗体进行了鉴定。结果表明，抗体能够与EV71 VP1特定的氨基酸序列结合，并且具有良好的专一性和亲和力。此外，抗体的纯度和浓度也得到了确定。