岛津LC20AP型高效液相色谱仪SOP.docxVIP

PAGE 1 PAGE 1 岛津 LC-20AP 型高效液相色谱仪 SOP 一、 系统配置 系统组成：本系统由 2 个LC-20A 溶剂输送泵分为A,B 泵、手动进样器、C18 填料色谱柱、SPD-20A 紫外－可见检测器、LC 工作站LC Solution 等组成。 二、 准备工作 1、流动相准备：根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（水使用双蒸水，其他有机溶剂要求色谱纯，无机盐缓冲液浓度一般低于 20mmol/L）用合适的 0.45μm 滤膜过滤（有机相和水相分别选用各自的专用滤膜，有机相用尼龙，水相用纤维素），超声脱气 30min 以上待用。 2、色谱柱准备：根据待检测样品的需要选用合适的色谱柱，柱进出口方向应与流动相流向一致 （检查柱上“FLOW”流向）。 3、样品溶液配置：配置样品和标准溶液（也可在平衡系统时配），用合适0.45μm 的样品过滤器过滤后待用。如检测中发现检测峰拖尾严重，可稀释后使用。严禁使用未经处理的浑浊溶液进样。 4、检查仪器各种部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。 三、 开机、参数设定及平衡系统 1、接通电源，依次开启稳压电源、A 泵、B 泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，启动工作站软件。 2、排气泡或更换流动相的操作方法（操作时虑头必须全部浸入流动相中，否则可能带入气泡。更换流动相时，须先把泵关掉，等柱压为零再拿出滤头更换）。 将 A/B 管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中； 逆时针转动A/B 泵的排液阀 180o，，打开排液阀； 按 A/B 泵的 [purge] 键，pump 指示灯亮，泵大约以 9.9 ml/min 的流速冲洗，3 min（可设定）后自动停止； 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀(泵运行状态，绝对不能关闭排液阀)。 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min， 按[pump]键，冲洗 3 min 后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。 3、参数设定 确保在【LC 实时分析】窗口的状态显示区域中，显示了【就绪】。 在【仪器参数视图】中，设置要在分析中使用的仪器参数。单击【正常】显示一个标签， 可以在其中输入分析条件，例如采集时间、泵流速、检测器波长和柱温箱温度等。 3.2. 参数设定完成后，单击【下载】将设置保存到仪器系统中。4、平衡系统 打开“LC 工作站LC Solution”软件，输入实验信息并设定各项方法参数。 等度洗脱方式 按 A 泵的[pump]键，A、B 泵将同时启动，pump 指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需 6 倍柱体积的流动相。 检查各管路连接处是否漏夜，如漏液应予以排除。 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过 1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，进行气泡排除操作。 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min,噪声为0.001mV 时，可认为系统已经达到平衡状态，可以进样。 梯度洗脱方式 以检查方法规定的梯度初始条件，按4.2.2 项以下方法平衡系统。 在 进 样 前 运 行 1~2 次 空 白 梯 度 。4.4．如果使用前色谱柱中保存的流动相为纯甲醇或纯乙睛，而新流动相中含有缓冲盐时，应先用纯水冲洗色谱柱十分钟左右再使用流动相，以免盐析出损坏系统。 4.5. 如系统为正相或反相交换使用，应先将所有管路用异丙醇清洗后再换新流动相使用。四、检测 1、进样前按检测器[zero]键调零,或设置每次进样前基线归零（仪器-系统设置-检测器-勾选“自动归零”）。 2、设置单次运行程序，更改泵的限压为30 PMa,单击“单次运行”，描述样品数据。 2、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。 3、每次进样量要基本一致，进样针里不可有气泡，如有，及时赶去。 4、在进样阀处于“Inject”状态时，插入进样器，迅速旋转至 load 状态，注入样品，旋回 inject 位置，进样结束。 5、至样品检测结束，在LC 工作站LC Solution 色谱工作站软件上计算结果。五、清洗系统关机 1、手动进样器清洗： 用注射器吸 20ml 超纯水后套上冲洗头，将冲洗头轻轻顶在进样口上（不宜用力过大，否则容易损坏进样口），使进样阀保持在load 位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。 2、色谱柱清洗： 继续以分析中使用流动相冲洗 10 分钟以上，待基线平稳后关闭检样器，冲洗色谱柱。 3、如果流动相不含缓冲盐或酸碱，可以用甲醇：水＝70：30（或用纯甲醇）直接冲洗30