免疫组化的原理与操作.pptVIP

6)、二抗（生物素化IgG）反应：建议湿盒内 37OC1h，另外仪器显示温度37℃，但实际只有23℃，自然结果难以令人满意。7)、SABC染色（37℃）：这是博士德的人性化之处，直接就可以用。8)、DAB显色镜下控时：DAB浓度应该比推荐的要低一些，这样可以便于控制反应时间以及在合适的时候中止反应。同时注意，使用后残余的DAB应妥善处理，而不是随便倒入下水道，因为它有致癌性。9)、苏木素轻度复染：不建议使用。尽管复染后标本层次分明，但实际情况是，这样有时也会(Hui)掩盖阳性结果，从而使前功尽弃。10)、脱水透明：脱水乙醇的浓度由低到高，有一个较准确判断脱水成功与否的办法是：观察透明后盛二甲苯容器的壁，若发现白色雾状现象，则说明脱水不成功，应再次脱水。透明时间不要太长，1分钟左右就可以了。11)、封片：封片时，中性树脂量宜少，同时注意不要产生气泡。 第三十一页，共四十页。 （三）免疫组化染色基本技术及注意事项 1．实验计划 根据课题的内容选用动物，选用配套的Ab。如Ab-I鼠抗人的抗体，与(Yu)其他种属间无交叉，则不能用其他动物，而且Ab-Ⅱ必须是羊抗鼠，若 PAP法Ab-Ⅲ必须来源于鼠，否则不能连接成复合物 ② 若要比较染色深浅在对照组与实验组间的差 异，在贴片方面最好贴于同一张载片上，否则无可比性。 ③ 选用的试剂可靠，货源充足，随时可取。 第三十二页，