PEDF基因重组慢病毒载体的构建及其对大鼠心肌血管生成的影响的中期报告.docxVIP

PEDF基因重组慢病毒载体的构建及其对大鼠心肌血管生成的影响的中期报告 一、前言 PEDF是血清中含量较高的蛋白质，对肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用，同时还具有抗血管生成、抗炎症、神经保护等多种生物学效应。因此，PEDF被广泛用于治疗多种疾病，例如肿瘤、黄斑变性、糖尿病等。本研究旨在构建PEDF基因重组慢病毒载体，并探究其对大鼠心肌血管生成的影响。 二、材料与方法 1. 构建PEDF基因重组慢病毒载体 （1）设计引物并扩增PEDF基因 （2）将PEDF基因PCR产物克隆至pMD19-T Simple载体 （3）将pMD19-T Simple载体中的PEDF基因克隆至pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒载体中 2. 慢病毒的包装与感染 （1）HEK293T细胞贴壁培养 （2）将pLVX-IRES-ZsGreen1-PEDF载体与慢病毒包装载体共转染至HEK293T细胞中 （3）搜集慢病毒中间产物 （4）将中间产物滴加至H9C2心肌细胞中 三、结果分析 1. PEDF基因克隆与载体构建成功 通过PCR扩增PEDF基因，并克隆至pMD19-T Simple载体中，测序证实序列正确。将pMD19-T Simple载体中的PEDF基因克隆至pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒载体中，经酶切和测序鉴定，证实构建成功。 2. 慢病毒包装与HEK293L细胞感染成功 通过光学显微镜观