微流控芯片优选精子及SERPINA5提升精子体外获能效率的研究.pdfVIP

万方数据 万方数据 中文摘要 中文摘要 辅助生殖技术（Assisted Reproductive Technology ，ART ）是现代医学中治疗 不孕不育的重要手段。然而，目前ART 整体成功率较低，提升与卵子结合前的 精子质量是提升ART 成功率的关键。在ART 过程中，获得男性不育患者精液后， 首先需进行精子优选，通过剔除低质量精子与杂质细胞得到高质量精子，随后需 对优选后精子进行体外获能，只有成功获能后的精子才能与卵子结合。因此，如 何对精子优选和体外获能两个过程进行改善成为提高ART 过程中精子质量的关 键，亦是目前辅助生殖领域研究的热点问题。 已有研究表明，相较于传统精子优选方法，微流控芯片技术操作简便、对精 子损伤小，具有提升优选后精子质量的巨大潜能；而对精子体外获能而言，获能 培养液一直是关键一环，研究者们尝试向培养液中增添各种不同物质来提升精子 体外获能效率、优化体外受精前的精子质量，并已取得一些进展。然而：①现有 的微流控芯片大多设计较为复杂、成本较高。②目前已有研究中的精子培养液添 加物仍然很少，并且对精子体外获能的效果并不稳定，而卵丘卵母复合物 （cumulus-oocyte complex ，COCs ）则在体内受精过程中分泌促进因子。 本研究共分为四个部分：①自制微流控芯片，研究其在精子优选过程的效果 （第一、二部分）；②通过添加小鼠COCs 对现有人输卵管液培养液（Human Tubal Fluid ，HTF ）进行改良，研究其在体外获能过程中优化精子质量的效果（第三、 四部分）。 第一部分 方法：以聚甲基丙烯酸甲酯（polymethyl methacrylate ，PMMA ）为材料，按 功能所需自行设计、制作微流控芯片。收集不育患者的精液：①分别静置于微流 控芯片和无毒灭菌离心管中，比较 1h、2h 、3h、4h 后两组间的精子活力；②用 微流控芯片优选40min 、60min、80min，比较优选后的精子各项参数；③分别用 微流控芯片、密度梯度离心法和上游法进行优选，比较优选后的精子各项参数。 结果：①各时间点时，无毒灭菌离心管与微流控芯片中的精子活动率与前向 运动精子百分率均无明显变化（P0.05 ）；②较优选前，用微流控芯片优选40min 、 60min、80min 后的精子活动率与前向运动精子百分率均明显升高（P0.01 ），精 子浓度均明显降低（P0.01 ），但60min 组与80min 组精子浓度明显高于40min 组（P0.05 ）；③较密度梯度离心法与上游法，用微流控芯片优选后的精子活动 率与前向运动精子百分率均明显上升（P0.01 ），精子浓度与DNA 碎片率（DNA Fragmentation Index ， DFI ）明显下降（P0.05 ），正常形态精子百分率无明显变 化（P0.05 ）。 I 万方数据 中文摘要 结论：自制微流控芯片对精子基本无毒性，较两种传统方法，其优选后精子 在多项参数上显著提高；为 ART 尤其是卵泡浆内单精子显微注射 （Intracytoplasmic sperm injection ，ICSI ）技术中高质量精子的获得提供了一种简 单实用的参考方法；但其优选后精子浓度较低的不足也有待改良。 第二部分 方法：针对优选后的精子浓度较低的不足对微流控芯片进行改良。收集不育 患者精液：①分