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硕 士 学 位 论 文 用于核酸检测的全集成滑动式微流控芯片研制 Development of fully integrated SlipChip for nucleic acid detection 作 者 姓 名： 杨馥瑞 专 业： 机械电子工程 学 号： 指 导 教 师： 刘军山 完 成 日 期： 2022.5 大连理工大学 Dalian University of Technology 万方数据 大连理工大学硕士学位论文 摘 要 病原体是指能造成动植物感染的微生物或寄生虫，具体包括细菌、病毒、真菌 等。截止 2022 年，新冠病毒爆发近三年，造成了前所未有的经济动荡以及公共健康危 机。现场快速检测技术（Point of care testing, POCT ）能够在采样现场进行检测，快速 辨别病原体，阻隔烈性传染病的大面积传播。近年来，微流控技术在 POCT 方面有了 长足的发展，其具备的微型化、集成化和便携化等特点，特别适合用于病原体的即时 检测。微流控芯片如 FilmArray ，博奥芯片等早已被投入市场，长期应用于辨别血液感 染，急性呼吸道感染等多种疾病。 本文设计研发了一种基于可视化环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification ，LAMP ）的全集成微流控芯片，用于检测病原体核酸。芯片能够完成核 酸的提取、扩增功能，操作便捷简单。芯片的检测原理是基于病原体 RNA/DNA 提取 原理以及可视化 LAMP 等温扩增法，对于扩增后的产物只需用验钞笔激发荧光，肉眼 即可判断阳性样本。 芯片的设计上采用了磁珠法、抽吸混合法等多种方法，最终可完成核酸由提取到 扩增的过程。为实现该过程，芯片分为三大功能区进行设计，共存在多个试剂存储 池、一个混合池、以及多个扩增反应池。值得一提的是，芯片在扩增区采用了独特的 滑动设计，无需复杂阀门就可实现液体分隔，16 个扩增反应池至多可实现 16 种病原体 的多靶点扩增。 本文主要开展了以下工作： （1）设计滑动式微流控芯片内部腔室并对其结构进行改良，制备芯片，包括：核 酸提取的方案选择，气动以及磁控方案设计；核酸提取区、混合区以及扩增区三个功 能区的内部腔室设计，以及排布与尺寸改良；比较了选用 PDMS 和 PC 材料制备芯片 的优缺点；总结了芯片的工作流程，以及实验芯片性能的方法。 （2 ）对芯片的性能进行测试。运用 COMSOL 仿真软件与实验的方法，比较方波 混合器与抽吸混合法的优缺点。测试了核酸扩增区的扩增反应池的密封性能。探讨了 特制石蜡的配比等等。 （3 ）针对病原体的检测与参数优化。在试管中与芯片上，都进行了对虾白斑综合 征病毒（WSSV ）阳性质粒的检测下限测试。对芯片检测的重复性和特异性都进行了测 试。 关键词：现场快速检测；微流控芯片；LAMP；磁珠法 - I - 万方数据 用于核酸检测的全集成滑动式微流控芯片研制 Development of fully integrated SlipChip for nucleic acid detection