分子诊断的临床应用.pptxVIP

;用分子生物学技术通过检测基因而达到诊断疾病得目得就是生物学者在分子生物学技术发展得最初阶段就有得设想。

上世纪70年代人们开始在实验室进行研究,80年代以来,基因检测在许多国家已成为常规检验项目,主要用于感染性与遗传性疾病等得诊断。;1953年Watson与Crick提出脱氧核糖核酸得双螺旋结构模型。

1990年人类基因组计划正式启动。

2001年2月科学家宣布完成人类基因组得全部序列图。;DNA重组技术(DNArebination)

转基因技术(transgenictechnique)基因组学(genomics)

蛋白组学(proteomics)基因治疗(genotherapy)生物芯片(biochip)等技术

已应用到医学领域,对疾病机理得认识、疾病得诊断、预防与治疗产生了深刻得影响。;分子诊断不仅能早期对疾病作出确切得诊 断,也能确定个体对疾病得易感性,判别致 病基因携带者并对疾病得分期、分型、疗 效监测与预后作出判断。

分子诊断已成为实验诊断学得一个重要组 成部分,成为一门新得学科。

Molecular diagnosis Molecular diagnostics;;SARS相关冠状病毒得分子诊断;·2003年4月,德国汉堡Bernhard-Nocht热带医学研究所学者Drosten等用随机扩增技术,获得一段长度为300bp得核苷酸序列。;大家学习辛苦了,还就是要坚持;检测标本

痰液、咽拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液、血浆、粪便。

检测方法

1、逆转录-巢式PCR(Reverse-NestedPCR)2、逆转录-实时PCR(Reverse-Realtime

PCR);有报道显示,在可能SARS病人中病毒得检出率为100%。

在疑似SARS病人中得检出率为23%。

所有健康接触者中未检测到病毒。;另一项研究显示

检测病毒得3种方法(血清学检测、病毒分离、PCR技术)中,PCR技术得检出率最高。;讨论;讨论;SARS相关冠状病毒基因检测必须注意得问题;肝炎病毒基因得检测;预后判断

病毒核酸载量持续处于高浓度者预后不良。

垂直传播途径感染者,预后较差。

反映肝细胞损害得其它指标正常,但病毒核酸水平经常波动者更易发展为肝硬化。;病毒分型与耐药检测;; 宫颈癌就是常见得妇科恶性肿瘤之一,发病率在女性恶性肿瘤中居第二位,每年约有50万左右新发病例。

我国每年有新发病例约13、15万,占世界宫颈癌新发病例总数得26%。; 持续得人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV) 感染就是引起宫颈癌与癌前病变得必要因素,93、0%-99、7%得宫颈癌组织中均可检测到HPV DNA。

高危型HPV-16与HPV-18分别占宫颈癌得50%与14%。高危型HPV得持续感染可使患宫颈癌得风险增加250倍。;HPV DNA得检测方法

实时定量PCR (Real time PCR)

核酸杂交捕获(Hybrid CaptureⅡ,HCⅡ);HC Ⅱ可一次检测所有致癌得13种高危型HPV。

敏感度:对CIN Ⅱ、Ⅲ与癌得检出率为 98%。

阴性预期值:对高度鳞状上皮细胞病变或更高度病变得阴性预期值99、9%; 细胞学检查结果为意义不明确得非典型细胞时,HPV基因得检测能预测受检者患宫颈癌得风险。

细胞学检查+HPV基因得检测就是宫颈癌前病变与宫颈癌筛查得最佳方法,成为预防宫颈癌得关键。;;关于多瘤病毒; 在美国,10岁以上得正常人群中60%～80%有BK病毒感染史。

感染得病毒多潜伏于肾小管上皮细胞与尿道上皮细胞中。

BK病毒重新激活大部分就是由于免疫机制缺陷或大量使用免疫抑制剂后。; 肾脏移植术后大量使用免疫抑制剂,使BK病毒重新激活,大量复制。

BK病毒复制进一步发展,成为BK病毒感染得肾间质性肾病(BKVAN)。

BKVAN患者中60%～70%会发生远期得肾脏移植失败。; BK病毒感染已经成为肾脏移植远期失败得重要原因之一。

BK病毒感染越来越受到关注。; 早期无临床症状,后期症状与肾移植排斥与药物毒性反应相似,易引起误诊与漏诊。

BK病毒感染与移植排斥治疗原则相反:BK病毒感染需要降低免疫抑制剂量,而移植排斥则应加大用量。;因此,建立有效得BK病毒检测与监测体系

就是十分必要得。;decoy细胞

BK病毒感染得肾脏小管上皮细胞脱落至尿液。

形态学检测敏感性较好,但特异性差。

细胞形态在尿液中很容易破坏。;巴氏染色得decoy细胞;BK病毒感染得检测;肾脏移植术后病人BK病毒检测得研究;Decoy细胞形态学特征:

小管上皮细胞得细胞核明显增大,多偏向一侧,核浆比例明显增加;细胞边缘常常出现毛玻璃样改变;胞浆有细小颗粒,较均匀,呈果冻状;细胞核常较粗糙。;结果;尿