研究基因功能的实验方案.pdfVIP

基因功能研究一般先用生物信息学分析对基因的结构和功能做预测，然后就

要对我们的推测进行验证，如何验证一个基因的功能，目前最常用的基因功能研

究策略为功能获得与功能失活。

1、功能获得策略是指将基因直接导入某一细胞或个体中，通过该基因在机

体内的表达，观察细胞生物学行为或个体表型遗传性状的变化，从而鉴定基因的

功能。常用的功能获得的具体方法有基因过表达技术以及CRISPR-SAM技术等。

2、基因的过表达技术：基因过表达技术是指将目的基因构建到组成型启动

子或组织特异性启动子的下游，通过载体转入某一特定细胞中，实现基因的表达

量增加的目的，可以使用的载体类型有慢病毒载体，腺病毒载体，腺相关病毒载

体等多种类型。当基因表达产物超过正常水平时，观察该细胞的生物学行为变化，

从而了解该基因的功能。基因过表达技术可用于在体外研究目的基因在DNA、

RNA和蛋白质水平上的变化以及对细胞增殖、细胞凋亡等生物学过程的影响。

可使用产品：过表达慢病毒、cDNA克隆（可用作ORF克隆）

CRISPR-SAM技术：CRISPR-SAM系统由三部分组成：第一个部分是dCas9与VP64融合

蛋白；第二个部分是含2个MS2RNAadapter的sgRNA；第三个是MS2-P65-HSF1激活辅助

蛋白。CRISPR-