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几种绿藻生长速率及叶绿素含量的研究

光对植物生长的影响主要是国内外学者进行的。光周期、光谱强度和光谱因素对单胞藻生长的影响也有许多报告[1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12]。但由于藻的种类不同和试验条件的不同,其结果也存在一定的差异。本试验中,作者选取生产上常用的小球藻、湛江等鞭金藻、青岛大扁藻和绿色杜氏藻为研究对象,探讨了光照周期、光照强度和光质对4种藻的生长速率、叶绿素含量的影响,并首次报道了光质对扁藻细胞周期的影响。旨在寻找培养单胞藻的最佳光照条件,以指导生产实践。

1材料和方法

1.1海水淡化预处理

试验用小球藻Chlorellasp.、湛江等鞭金藻Isochrysiszhanjiangensis(简称等鞭金藻)、青岛大扁藻Platymonashelgolandica(简称扁藻)和绿色杜氏藻Dunaliellaviridis(简称杜氏藻)均由辽宁省海洋水产研究所提供。

试验用海水需经沉淀、过滤后煮沸,锥形瓶也经煮沸消毒。用250mL锥形瓶取藻种(约200mL),在与培养条件相同的环境下放置两昼夜使其稳定,取上层藻液接种,然后在设定的各种试验条件下进行培养,培养期间每天摇瓶数次。营养盐按Conway配方配制,与海水的体积比为1∶1000。

1.2测试方法

1.2.1藻的不同光照和不同光照对藻设置的影响

设光照周期为24L∶0D、18L∶6D、12L∶12D、6L∶18D和0L∶24D共5个梯度组,每种藻在每一光照周期下设置3个重复。将接种后的锥形瓶置于光照培养箱(HPG-400型)内培养,培养温度为(25±1)℃,光照强度为3000lx,培养6d后取出,分别测定其生长速率和叶绿素含量。

1.2.2藻体光照强度

设光照强度为10000、5000、3000、1000、500lx共5个梯度组,每种藻在每一光照强度下设置3个重复。在室温为21～27℃、光照周期为12L∶12D下,培养6d后取出,分别测定其生长速率和叶绿素含量。

1.2.3生长和叶绿素含量

将4种藻分别置于红光(650～760nm)、绿光(500～560nm)、蓝光(430～470nm)和白炽灯(390～760nm)下进行培养,每组设3个重复。在室温为21～27℃、光照周期为12L∶12D下,培养6d后取出,分别测定其生长速率和叶绿素含量。同时,用EPICP0-XL型流式细胞仪检测扁藻的细胞周期,变异系数CV为2.0%,样品浓度为105～106个/mL。所测结果以直方图表示,细胞周期图谱由电脑自动生成并打印。

1.3测量

1.3.1浮游植物的生长特性

种群增长的测定是采用细胞视野计数法。每次取样前先将锥形瓶中的藻液摇匀,取0.1mL藻液置于浮游植物计数框上,在Olympus显微镜下(600倍),计数40～50个视野。

藻类生长的变化一般通过细胞密度和生长速率的变化来反映,生长速率μ的计算公式为:

其中:Nt是第t天的细胞数量;N0为初始细胞数量;t为培养时间。

1.3.2叶绿素提取与测定

采用分光光度法测定叶绿素的含量。取一定量的藻液用真空泵抽滤,抽干后将藻及滤膜一起放入具塞离心管中,加入体积分数为95%的丙酮溶液至10mL,振荡提取叶绿素,放置暗处过夜,在3000r/min下离心15min,取上清液测定其吸光值。

2结果

2.1年生长量测定

由图1可见,在光照周期为18L∶6D下,小球藻、等鞭金藻、扁藻和杜氏藻(以下排序同)的生长均最快,

生长速率分别为0.227、0.150、0.175、0.360个/d,而在0L∶24D光照周期下的生长最慢。

由表1可见,4种藻在18L∶6D光照周期下,其单位水体的叶绿素含量最高,分别为411.77、912.61、501.94、1452.54μg/L,而在0L∶24D下的叶绿素含量最低。

2.2单位水体叶绿素a/b值

由图2、表2可见,在光照周期为12L∶12D,光照强度为5000lx时,4种藻的生长速率和叶绿素含量均最高(分别为0.225、0.188、0.174、0.261个/d和343.21、282.64、341.13、802.77μg/L),而在500lx强度照射下,4种藻的生长速率和叶绿素含量均最低。在光照强度为1000～10000lx时,小球藻的生长速率差异不大。3种绿藻单位水体叶绿素a/b的值:小球藻为2.25～2.81,扁藻为2.03～2.43,杜氏藻为2.38～2.71;等鞭金藻单位水体叶绿素a/c的值为2.33～2.60。

2.3光谱成分对试验藻类的生