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实时荧光定量PCR技术：定量分析功能及软件应用

定量PCR除可以对样品的初始浓度进行准确定量外，还有其它多种丰富的应用。还包括基因表达调控情况的分析、等位基因的分析等，那么这些功能是如何在一台定量PCR仪上实现的呢？下面将进行一一介绍。

利用标准曲线对样品的初始浓度进行定量：

用浓度的标准品绘制标准曲线来对未知样品定量，首先要有一组稳定的标准品。标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA，也可以是比扩增片段长的纯化后的PCR产物，当然也可以是基因组DNA，甚至cDNA，但前提是所有的作为标准品的核酸都必需保证稳定。一般一条标准曲线取四到五个点，浓度范围要能覆盖样品的浓度区间，以保证定量的准确性。一般一个点重复三至五次，对于常期稳定使用的标准品可以适当减少重复的次数。

以Rotor-Gene3000的操作为例，以标准曲线对未知样品定量是默认的分析方法。软件可在反响尚在进行时就对结果进行分析，结果随着反响的进行可实时更新，当然也可以等反响完全结束后再进行分析。

点示“Analysis〞，弹出分析框，默认分析功能即为“Quantitation〞，点击“Show〞，软件即自动给出包括标准曲线〔包括R值，R平方值，扩增效率、标准曲线公式等〕、标准化的荧光曲线、各样品计算浓度〔包括标准偏差、变异系数等〕在内的结果。

假设是使用SYBRGreenI法，还可进行熔解曲线分析，以判断退火温度