实时定量PCR快速检测人全血中烟曲霉基因组DNA的方法学研究的开题报告.docxVIP

实时定量PCR快速检测人全血中烟曲霉基因组DNA的方法学研究的开题报告

一、研究背景及意义

烟曲霉是一种常见的真菌，可以在自然界的多种环境中存在。烟曲霉能够产生毒素，对人类和动物的健康造成威胁，其中最为知名的毒素是黄曲霉素。黄曲霉素是一种会引发癌症的强致癌物，同时也会引发肝癌、肝衰竭等疾病，是危害人类健康的重要因素。感染烟曲霉的途径多种多样，其中包括食品污染、空气传播、皮肤接触等。目前，对于烟曲霉感染的诊断主要依赖于文化方法和常规PCR技术，但这些方法要求耗时长、操作繁琐，无法满足临床等需要快速诊断的场合。

因此，开发一种简便、快速的实时定量PCR方法，能够在短时间内从全血中检测到烟曲霉基因组DNA，将为临床快速检测烟曲霉感染提供可靠的技术手段。

二、研究内容

本研究将以实时定量PCR技术为基础，对采集到的人全血样品进行检测，以分析样品中是否存在烟曲霉基因组DNA。研究过程中，将评价实时定量PCR检测标准曲线的建立方法，以及检测体系的优化方法，得到充分的实验结果，并对样品的检测结果进行数据统计与分析。

三、研究方法

1.样品采集

收集50名疑似有烟曲霉感染的患者的全血样品，并与20名无感染的人的全血样品作为对照组。

2.实时定量PCR建立标准曲线

选取烟曲霉基因组DNA的特异性引物和探针，调试反应体系，建立实时定量PCR标准曲线。

3.实时定量PCR检测

将标准曲线和全血样品中提取的DNA进行PCR扩增，进行样品检测。

4.数据分析

对实验结果进行统计分析，评估实时定量PCR检测烟曲霉基因组DNA的客观性、准确性和灵敏度，以及开展结果预警等相关研究工作。

四、研究进展

目前，已完成对烟曲霉基因组DNAPCR扩增的反应体系的优化工作，在进一步调试反应条件，建立稳定重复性的实验模型。

五、研究预期成果及创新点

本研究的预期成果是建立一种实用的快速检测烟曲霉基因组DNA的实时定量PCR方法，能够在短时间内给出指导性的检测结果，为烟曲霉感染的临床诊断提供新的技术手段。研究的主要创新点在于该技术在短时间内获得精确、可靠的检测结果，对于病人的病情及时得以评估，为症状的治疗提供重要参考。