中和试验修订版.pdf

中和试验

中和试验是病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力的试验方法。

所属分类：免疫学所属分类：免疫学所属分类：免疫学

概述

动物受到病毒感染后，体内产生特异性中和抗体，并与相应的病毒粒子呈现特异性结合，因而阻止病

毒对敏感细胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。

中和试验(NeutralizationTest)是以测定病毒的感染力为基础，以比较病毒受免疫血清中和后的残存

感染力为依据，来判定免疫血清中和病毒的能力。

两种试验方法介绍

中和试验常用的有两种方法：一种是固定病毒量与等量系列倍比稀释的血清混合，另一种是固定血清

用量与等量系列对数稀释(即十倍递次稀释)的病毒混合。

(一)定血清－稀释病毒法(病毒中和试验)

1.病毒毒价的测定毒价单位：衡量病毒毒价(毒力)的单位过去多用最小致死量(MLD)，即经规定的途

径，以不同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致全组试验动物死亡的最小剂量。但由于剂量的递增与

死亡率递增不呈线性关系，在越接近100%死亡时，对剂量的递增越不敏感。而一般在死亡率越接近50%

时，对剂量的变化越敏感，故现多改用半数致死量(LD50)(LD50)作为毒价测定单位，即经规定的途径，以不同的

剂量接种试验动物，在一定时间内能致半数试验动物死亡的剂量。用鸡胚测定时，毒价单位为鸡胚半数致

死量(ELD50)或鸡胚半数感染量(EID50)。用细胞培养测定时，用组织细胞半数感染量(TCID50)。在测定。在测定

疫苗的免疫性能时，则用半数免疫量(IMD50)或半数保护量(PD50)。

(1)LD50的测定(以流行性乙型脑炎病毒为例)。

测定方法：将接种病毒，并已发病濒死的小鼠，无菌法取脑组织，称重、加稀释液充分研磨，配制成

10-1悬液，3000r/min离心20分钟，取上清液，以10倍递次稀释成10、10、10……1010……10，每个稀释度分

别接种5只小鼠，每只脑内注射0.03ml，逐日观察记录各组的死亡数。

表2-24LD50的计算（接种剂量为0.03ml）

积累总计

病毒稀释度接种鼠数活鼠数死鼠数死亡比死亡率(%)

活鼠死亡

1050501515/15100

1050501010/10100

10514155/683

10541511/617

105501000/100

105501500/150

LD50的计算：按Reed和Muench氏法计算。

高于50%的死亡分数-50%83%-50%

距离比例────────────────────=──────=0.5────────────────────=──────=0.5

高于50%的死亡百分数-低于50%的死亡百分数83%－17%17%

LD50的对数高于50%病毒稀释度的对数+距离比例×稀释系数的对数