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免疫共沉淀与Western

实验方法:

细胞转染后36小时后，吸掉培养液，用PBS小心洗一遍细胞，不要把细胞冲掉，吸掉PBS。将细胞置于冰上，加入500gl预冷的Ixlysisbuffer,于4°C裂解细胞5分钟。

将细胞裂解物转移到eppondorf管内，于冷冻离心机4C13500转离心30分钟。将离心好的细胞裂解物的上清液分为两份，一份35gl，加入等体积的2xSDSsamplebuffer,混匀后于100C煮沸10分钟，稍离心后取10gl左右上样到PAGE胶，进行电泳。

分beads：按每管5glAgroseA/Gbeads混合5gl抗体计算总量，补充lysisbuffer，使每管均匀分配到50gl，每管再加入400gllysisbuffer，备用。

取400gl上清液，加入到已分好的beadsbuffer中，使终体积达到850gl，固定到混匀器上使匀速吸附3小时。

500gllysisbuffer洗beads三次，每次于冷冻离心机4C3000转离心3分钟。

加入30gllysisbuffer与35gl2xSDSsamplebuffer混合，于100C煮沸10分钟，稍离心后取10gl左右上样到PAGE胶，进行电泳。

电泳完毕，取下PAGE胶，与PVDF膜做成”三明治”形状，用湿转法进行电转1小时。

电转完毕，取下P