禽病原性大肠杆菌E058株iucD、ftsk基因突变株的构建及其致病性评价的开题报告.docxVIP

禽病原性大肠杆菌E058株iucD、ftsk基因突变株的构建及其致病性评价的开题报告

一、选题的背景和意义

禽病是近年来围绕食品安全问题备受关注的问题之一，其中禽病原性大肠杆菌是一种常见的禽病病原菌。其主要病症为肠胃炎及呼吸道感染，会导致饲养场禽类死亡率增加，造成巨大的经济损失。大肠杆菌的毒力主要来源于铁吞噬系统和分析系统。铁吞噬系统包括iucABCD和iroN等基因，可使菌株取得肠道中稀有的氧气。分析系统包含papABCD等基因，可使菌株附着于宿主黏膜上，成为病原菌。因此，本研究拟构建禽病原性大肠杆菌E058株iucD、ftsk基因突变株，对其致病性进行评价，并探究iucD、ftsk基因的功能，为进一步了解禽病原性大肠杆菌的毒力机制提供依据。

二、选题的研究内容和方向

本研究拟以CRISPR/Cas9技术为基础，构建禽病原性大肠杆菌E058株iucD、ftsk基因突变株，并对其进行遗传学鉴定和基因表达分析，探究两者功能。同时，以野生型菌株为对照组，比较三株菌株在细胞毒性、肠道附着等方面的差异，评价iucD、ftsk基因对菌株致病性的影响。

三、选题的研究方法和步骤

1.禽病原性大肠杆菌E058株基因组测序和基因注释；

2.合成iucD、ftsk基因突变体的sgRNA，制备Cas9蛋白质；

3.利用iucD、ftsk基因的sgRNA和Cas9蛋白质合成RISE双肽核酸复合物，导入禽病原性大肠杆菌E058株；

4.利用PCR和DNA测序鉴定突变株；

5.利用RT-qPCR检测突变株与野生型菌株的基因表达量；

6.利用细胞毒性试验和肠道附着试验评价突变株的毒力。

四、预期的研究结果及意义

预期通过研究，构建出禽病原性大肠杆菌E058株iucD、ftsk基因突变株，明确iucD、ftsk对禽病原性大肠杆菌毒力的作用机制。通过对突变株与野生型菌株的比较，确定两个基因与菌株的细胞毒性、肠道附着等方面的关系，为进一步研究禽病原性大肠杆菌的毒力提供依据，为今后制定防控措施提供指导。