结核分枝杆菌ClpX和ClpP2蛋白酶的克隆表达及其性质研究的开题报告.docxVIP

结核分枝杆菌ClpX和ClpP2蛋白酶的克隆表达及其性质研究的开题报告

1.研究背景和意义：

结核病是一种严重的传染病，由结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis,MTB）引起，危害极大。目前，全球范围内都存在着结核病的高发和易发区域，然而针对MTB的治疗行之有效的方法仍然十分有限，因此急需开展相关研究。MTB细胞内蛋白质的合成、折叠和降解都是由蛋白酶系统调控的。ClpP和ClpX这两类蛋白是MTB细胞内的关键蛋白酶，它们的功能主要是负责对异常蛋白进行降解。因此，对ClpP和ClpX的研究成为探究MTB细胞生物学特性，加强对结核病发病机理及治疗的认识的重要途径。

2.研究目的：

本课题旨在对结核分枝杆菌ClpX和ClpP2蛋白酶进行克隆表达，通过蛋白质表达纯化和活性测定，探究其生物学特性。

3.研究内容和方法：

3.1克隆表达MTBClpX和ClpP2基因的策略：

(1)基于MTBClpX和ClpP2的序列，设计ClpX和ClpP2重组原核表达载体;

(2)克隆获取完整ClpX和ClpP2基因，并将其植入到原核表达载体中;

(3)将载有ClpX和ClpP2基因的重组原核表达载体转化进大肠杆菌表达宿主中;

(4)对ClpX和ClpP2进行诱导表达

3.2蛋白质表达纯化

(1)以NiSepharose6FastFlow亲和层析柱纯化His-