ELISA的原理与应用.pptxVIP

ELISA的原理与应用

ELISA基本原理

ELISA类型及特点

ELISA操作步骤与注意事项

ELISA在医学领域的应用

ELISA在生物科学领域的应用

ELISA技术优缺点及发展前景

contents

目

录

01

ELISA基本原理

抗原是能够刺激机体产生免疫应答并能与免疫应答产物特异性结合的物质；抗体是机体受抗原刺激后产生的具有保护作用的蛋白质。

机体执行免疫应答及免疫功能的重要系统，具有识别和排除抗原性异物、与机体其他系统相互协调，共同维持机体内环境稳定和生理平衡的功能。

免疫系统

抗原与抗体

酶标记

利用酶的催化作用，将无色的底物转变为有色的产物，通过测定有色产物的生成量来推算待测物质的含量。

抗原抗体反应

将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。

02

ELISA类型及特点

原理

将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的特异性抗体，与抗原结合形成复合物，加入底物后显色，通过比色或荧光检测分析抗原含量。

特点

操作简便，适用于检测大分子抗原，但灵敏度相对较低。

将特异性抗体先固定在固相载体上，加入待检样品中的抗原，再加入酶标记的二抗与抗原结合，最后加入底物显色，通过比色或荧光检测分析抗原含量。

原理

灵敏度较高，可检测多种抗原，但需要选择合适的二抗和酶标记物。

特点

原理

将特异性抗体固定在固相载体上，同时加入待检样品中的抗原和酶标记的抗原，两者竞争与抗体结合。当待检样品中抗原含量越高时，与抗体结合的酶标记抗原就越少，最后加入底物显色后颜色越浅。通过比色或荧光检测分析抗原含量。

特点

适用于小分子抗原或半抗原的检测，具有较高的灵敏度和特异性。

先将一种特异性抗体固定在固相载体上，加入待检样品中的抗原，再加入另一种酶标记的特异性抗体与抗原结合形成复合物。最后加入底物显色，通过比色或荧光检测分析抗原含量。

原理

灵敏度高、特异性强、可定量检测抗原含量。但需要选择合适的两种特异性抗体和酶标记物。

特点

03

ELISA操作步骤与注意事项

按照试剂盒说明书，将所需试剂从冰箱取出，平衡至室温。稀释标准品，并准备好所需浓度的检测抗体和酶标二抗。

试剂准备

收集待测样本，如有需要，进行适当稀释或处理以去除干扰物质。对于血清或血浆样本，通常需进行离心以去除颗粒物质。

样品处理

VS

将处理好的样本和标准品加入已包被抗原或抗体的酶标板孔中，每孔加入相同体积的样本或标准品。

孵育

将酶标板密封后，在恒温箱中进行孵育，使样本中的抗原或抗体与固相载体上的抗原或抗体充分结合。孵育时间和温度需根据试剂盒说明书严格控制。

加样

孵育完成后，弃去孔内液体，用洗涤液充分洗涤酶标板，以去除未结合的抗原、抗体和其他杂质。洗涤次数和方式需按照试剂盒说明书进行。

洗涤完成后，向每孔中加入显色剂，显色剂中的酶会催化底物产生颜色反应。反应时间和温度需严格控制，以保证结果的准确性。

洗涤

显色

终止反应

在显色反应进行到一定时间后，向每孔中加入终止液，终止颜色反应。此时，颜色不再变化，可以进行结果判读。

要点一

要点二

结果判读

使用酶标仪测定各孔的光密度值（OD值），根据标准曲线计算样本中待测物质的浓度。注意在合适的波长下进行测定，以消除背景干扰。同时，需注意试剂盒的灵敏度、特异性和线性范围等指标，以确保结果的准确性。

04

ELISA在医学领域的应用

病毒感染检测

ELISA可用于检测病毒特异性抗体或抗原，如HIV、HBV、HCV等，帮助诊断病毒感染。

细菌感染检测

通过检测细菌特异性抗体或抗原，如结核杆菌、梅毒螺旋体等，ELISA可用于细菌感染的诊断。

寄生虫感染检测

ELISA可检测寄生虫特异性抗体，如疟原虫、血吸虫等，用于寄生虫感染的诊断。

自身免疫性抗体检测

ELISA可检测多种自身免疫性抗体，如抗核抗体（ANA）、抗双链DNA抗体（dsDNA）等，用于诊断自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等。

组织特异性抗体检测

通过检测针对特定组织的自身抗体，如抗甲状腺抗体、抗胰岛细胞抗体等，ELISA有助于诊断相应的自身免疫性疾病。

ELISA可用于检测肿瘤相关抗原，如癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）等，作为肿瘤筛查和诊断的辅助手段。

肿瘤相关抗原检测

通过检测针对肿瘤的特异性抗体，ELISA有助于肿瘤的早期发现和诊断。

肿瘤特异性抗体检测

药物浓度监测

ELISA可用于检测血液中的药物浓度，如抗生素、免疫抑制剂等，帮助医生调整用药方案。

药物滥用筛查

通过检测尿液或血液中的药物代谢物，ELISA可用于药物滥用的筛查和诊断。

05

ELISA在生物科学领域的应用

重组蛋白表达检测

利用E