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第四节 层析分离技术

层析法又称色谱法，色层法或层离法(chromatography)，是广泛应用的一种生物化学技术。层析法有多种类型，液体作为流动相的称为液相层析，气体作为流动相的称为气相层析。

按层析过程的机理不同，层析法可以分为下列几种类型：

吸咐层析：利用吸咐剂表面对不同物质吸咐性能的差异进行分离。

分配层析：利用不同物质在流动相和固定相之间的分配系数或溶解度不同，使物质分离。

离子交换层析：利用不同物质对离子交换剂亲和力不同而分离。

凝胶层析：利用某些凝胶对不同分子量的物质阻滞作用不同进行分离，亦称分子筛层析。

亲和层析：利用某些蛋白质能与配体分子特异而非共价地结合进行分离。层析法采用的方式主要是柱层析和薄层层折，前者将固定相或载体装入柱

内，使被分离的物质沿一个方向移动而达到分离，后者将吸附剂涂布成薄层，使样品在薄层上进行分离。

一、吸附层析

氧化铝，硅胶等物质具有吸咐其它一些物质的性质，而且对各种被吸附物质的吸附能力不同。吸附力的强弱，除与吸附剂本身的性质有关外，也与被吸附物质的性质有关。

(一)柱层析法

柱层析是用一根玻璃管。管内加吸附剂粉末，用溶剂湿润后，即成为吸咐柱，然后在柱顶部加入要分离的样品溶液，假如样品内含两种成分A和B，则二者被吸咐在柱上端，形成色圈，样品溶液全部流入吸附柱之后，加入合适的溶剂洗脱，A与B也就随着溶剂向下流动而移动，最后达