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《Science》方才发布的十大科学冲破中,占据首位确实是细胞从头编程技术(iPS,inducedpluripotentstemcells),这一才初初“面世”一年的壬细胞技术引发了生命科学研究领域的极大震动,引用《科学》杂志负责新闻的副主编RobertCoontz的话确实是“这项研究几乎在一晚上之间开启了一个生物学的新的领域,它有希望成绩医学上拯救生命的进展。”
由于这一技术的迅速进展,涌现了许多“干细胞技术新手”,可是关于如何培育这些细胞,和诱导细胞分化,初接触这一技术的研究人员常常感到束手无策,即便花了很多时刻仍是抓不准这些细胞的特性,不管是研究人类胚胎干细胞hESCs,仍是人类些细胞hiPSCs,都需要花费大量的时刻重复铺板,来保证这些细胞自然分化。
来自萨克生物研究学院(theSalkInstituteforBiologicalStudies)干细胞中心的主任TravisBerggren建议,关于新接触干细胞研究的实验人员来讲,在收到第一批冷冻细胞的时候,要抛开所有之前有关哺乳动物细胞培育的概念,因为许多标准细胞培育的技术方式或许并非适用于干细胞,而且由于多能性有关的细胞机制至今了解的并非多,因此要想明白在未分化状态,哪些培育物和材料能最好的诱导细胞,乃至进行特点描述,这些都可能超级困难。除此之外,要确保培育物不被细菌感染,注意要不断的对加入的试剂进行检测。
了解细胞
来自加拿大多伦多大学的PeterZandstra实验室的一项研究项目确实是:通过从单层细胞悬浮液中搜集人类胚胎干细胞hESCs,提高hESC分化的一致性和产量。
人类胚胎干细胞hESCs和人类诱导多功能干细胞hiPSCs的分化需要细胞聚集,可是细胞团中的细胞常常大小和形状不一,从而致使不同步分化。为了能解决一致性的问题,Zandstra实验室的博士后MarkUngrin尝试利用一些公布的实验指导手册获取单细胞悬浮液聚集体,刚开始的时候,他能取得稳固的聚集细胞,可是以后这些细胞就纷纷死了,他回忆道,“不同实验中细胞的大小都不一致,有时我在一个孔里能发觉几种聚集细胞。”
Ungrin花了6个月的时刻钻研细胞培育基,以后,他开始转向细胞本身,结果发觉了两个重要的因素:一个是他惊讶的发觉,通过几代传代的成熟的hESCs一样都会形成稳固的细胞聚集,而在分化前时期的细胞那么偏向于形成单细胞悬浮,因此Ungrin决定在细胞分化之前搜集细胞。另外一个发觉确实是一种Rho关联的激酶,这种小分子抑制剂在之前的研究中发觉能提高细胞存活率,Ungrin发觉关于他的干细胞,这种小分子也起作用。
Ungrin表示,“进行人类胚胎干细胞研究最令人头疼的事之一,确实是你在实验室中做的工作很难重复,而你又不明白是什么缘故”,即便是用不同的移液器进行平板转移,也有可能造成不同的结果。因此Ungrin建议研究人员除记住培育基,还要记住自己细胞的年龄时期和状态,这些都会阻碍存活率。
干细胞培育确实是颇令人苦恼的一项实验进程,这是许多刚进行干细胞研究的实验人员所没成心料到的,只是通过愈来愈多积存的实战体会或许能渐渐悟出其中的前因后果,只是也能够利用一些商品化的产品帮忙咱们尽快的解决这些问题。
针对干细胞培育,闻名的细胞培育产品公司HyClone(属于ThermoScientific)推出了AdvanceSTEM系列产品,这一系列产品要紧支持小鼠干细胞研究的各类应用,包括细胞扩增,维持小鼠胚胎干细胞和人成体间质干细胞的未分化状态,将间质干细胞专一的分化成神经元,脂肪细胞,软骨细胞和骨细胞等类型的细胞等等。
其中AdvanceSTEM?推荐的DMEM是一款低渗DMEM,这款产品具有一样常规细胞培育的阻碍因素(生长因子等),重要的是具有与小鼠胚胎干细胞相近的最正确渗透压,而且其特异的配方保证在37°C5%CO2的培育条件下能够维持生理状态下的pH,这些对干细胞生长和维持一致性超级有益处,另外能够在那个DMEM中加入AdvanceSTEM?血清替代物,帮忙使胚胎干细胞维持在未分化的状态,AdvanceSTEM?血清替代物是一种无血清培育物,血清是动物细胞离体培育常见的培育液,在某些情形下不能用血清培育细胞,比如观看一种生长因子对某种细胞的作用。
另外Invitrogen公司在今年5月就推出了首个间充质干细胞的无血清培育基,专门用于间充质干细胞(MSC)或来源于骨髓的干细胞的培育。STEMPROMSCSFM是完全限定的,意味着培育基中的每一种成份都是已知量的,因此排除显著的批间差。那个培育基能使MSC维持未分化状态超过9代,而用传统的加血清培育基培育的细胞在5代后就开始显现分
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