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新霉素ELISA方法的建立的中期报告
根据新霉素(Neomycin)ELISA方法的建立进展,本中期报告旨在讨论实验设计、实验过程及初步结果。
研究设计
本实验采用间接ELISA法测定新霉素的残留量。首先,制备抗新霉素抗体,并将其固定在96孔板的表面。其次,样品与抗体反应,未结合的样品被洗去,然后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗进行二次反应,未结合的二抗被洗去,最后加入底物TMB(3,3,5,5-四甲基苯胺)发生颜色反应,停止反应后测量吸光度值,即可计算出样品中新霉素的浓度。
实验过程
1.抗体制备
将新霉素偶联至载体蛋白,免疫兔子,获得抗新霉素抗体。
2.样品处理
将不同浓度的新霉素加入不同浓度的食品样品中,用乙酸-乙腈(1:1)混合液提取新霉素,不同浓度的样品加入96孔板中。
3.ELISA测定
加入合适的抗新霉素抗体,进行反应,洗去未结合抗体,加入HRP标记的二抗,进行二次反应,洗去未结合的二抗,加入TMB底物进行颜色反应,测量吸光度值。
初步结果
目前,我们已成功制备了抗新霉素抗体,并通过ELISA方法初步测定了不同浓度的新霉素在不同样品中的残留量。在本次实验过程中,我们发现样品处理中的提取方法对实验结果影响较大,需要进一步优化。
总结与展望
通过实验,我们成功建立了新霉素ELISA方法,初步证明其可行性,并发现提取方法需要进一步优化。下一步将继续进行实验,获取更多的数据,并分析实验结果,探索新霉素ELISA方法的应用前景。
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