HY/T 0295-2020海绵种属分子鉴定技术规程.pdf

ICS07.060

A45HY

中华人民共和国海洋行业标准

HY/T0295-2020

海绵种属分子鉴定技术规程

Specificationofidentifyingspongebasedonmoleculardata

HY/T0295-2020

．品-‘-

剧昌

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由中华人民共和国自然资源部提出。

本标准由全国海洋标准化技术委员会CSAC/TC283）归口。

本标准起草单位：大连海洋大学、中国科学院大连化学物理研究所、大连金普新区农业农村发展服

务中心。

本标准主要起草人：付晚涛、曹旭鹏、杜萌萌、苏延明、王刚、吴孟嘉、张世杰、李东子、沈思思、

丁小涵、王玄、肖一帆、王少杰、鲁艳莉、李晶莹。

HY/T0295-2020

海绵种属分子鉴定技术规程

1范围

本标准规定了海绵种属分子生物学鉴定的原理与方法、海绵样品采集与保存。

本标准适用于海绵的样品采集、保存和分子生物学方法种属鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单〉适用于本文件。

GB/T12763.6-2007海洋调查规范第6部分：海洋生物资源调查

GB/T30744-2014深海微生物样品前处理技术规范

HY/T058-2010海洋调查观测监测档案业务规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

海绵sponge

目前已知仍然生存的最古老、最低等的多细胞动物，在动物界中单独构成多孔动物门。

3.2

DNA条形码DNAbarcode

生物体内能够代表该物种的、标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA片段，用于快速准

确识别、鉴定物种．

3.3

海绵条形码spongebarcode

海绵的保守基因序列信息的一种表述形式。

3.4

18SrRNA基因18SrRNAgene

编码18SrRNA基因的DNA序列。

3.5

细胞色素氧化酶亚基IcytochromeoxidasesubunitI

HY/T0295-2020

4原理

通过聚合酶链式反应〈简称PCR）分别扩增海绵的18SrDNA和COIDNA的部分序列，测序获得

各自序列信息后分别与已经鉴定的海绵18SrDNA和COIDNA序列比对，以此鉴定海绵种属。

5仪器与设备

5.1野外生物样品保存箱或保温箱．

5.2低温冰箱．

5.3研钵．

5.5水浴锅．

5.6高速低温冷冻

5.7紫外分光光

5.8

5.9

5.10

5.11

5.12

6试剂

6.1

6.2

6.3

6.4

6.5

6.6浓硫酸．

6.7蒸馆水或去离子Z

6.8蛋白酶K.

6.9Taq酶．

6.10琼脂糖．

6.11醋酸饵溶液（配方见附录A)•

6.12细胞裂解缓冲液（配方见附录A).

6.13TE缓冲液（pH7.6）（配方见附录A）。

6.14

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7海绵样晶采集与保存

7.1海绵样晶采集

首先，对于海绵及其周围环境，