医学知识一PNH一阵发性睡眠性血红蛋白尿的流式细胞术检测解读.pptxVIP

阵发性睡眠性血红蛋白尿的流式细胞术检测李智伟第一页，共三十七页。

PNH

(paroxysmalnocturnalhemoglobinuria)是一种罕见的获得性克隆造血干细胞疾病。但近年来有增多趋势。我国北方多于南方。半数以上发生在20-40岁青壮年。男性多于女性，与遗传及种族无关。本病起病隐袭缓慢，呈慢性过程，以贫血、出血为首发病症者较多，以血红蛋白尿起病者较少。第二页，共三十七页。

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血红蛋白尿睡眠有关，早晨较重，下午较轻尿液外观为酱油或红葡萄酒样;伴乏力、胸骨后及腰腹疼痛、发热等第四页，共三十七页。

原因因为补体作用最适宜的pH是6.8～7.O，而睡眠时呼吸中枢敏感性降低，酸性代谢产物积聚第五页，共三十七页。

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研究历史Strubing第一次报道PNHHam和Dingle证明了PNH患者的红细胞在血清酸化条件下，易发生溶血，这就是现在普遍使用的Ham实验1983年证实PNH患者GPI合成异常1993年pig-a基因突变第七页，共三十七页。

流式细胞术原理：X染色体上PIG-A〔造血干细胞经获得性体细胞基因〕突变导致糖化肌醇磷脂(GPI)锚合成障碍导致由GPI锚接在细胞膜上的一组膜蛋白丧失，包括CD16、CD55、CD59等第八页，共三十七页。

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GPI锚连接蛋白补体调接蛋白衰变加速因子(DAF或CD55)、膜攻击复合物抑制因子(MACIF或MIRL或CD59)、补体C8结合蛋白(HRF或C8bp)、膜辅助蛋白(MCP)。?粘附分子淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3或CD58)、Blast-1/CD48、CD67、CD66。第十页，共三十七页。

GPI锚连接蛋白酶类红细胞乙酰胆碱脂酶(AchE)、中性粒细胞碱性磷酶酸酶(NAP)、5’外核酸酶(CD73)。受体类中性粒细胞III型Fc受体(FcRIIIb或CD16)、单核细胞分化抗原(CD14)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(u-PAR)。血型抗原CD55携带的Comer抗原、AchE携带的Yt抗原。第十一页，共三十七页。

1型细胞CD59完全阳性第十二页，共三十七页。

补体激活途径C1C1C2,C4C4b2b(C3转化酶〕C3C3bP〔备解素〕PC3bBbC3bB(C5转化酶〕C4b2b3b或PC3bBbC8C9C6C7C5C5bC5b678C5b-9(MAC)CD59替代途径经典途径CD55Ag-Ab第十三页，共三十七页。

分析1.红系及粒系FSC/SSC设门 报告标本中CD55、CD59阴性比例第十四页，共三十七页。

做20~30份正常人血样划定阳性区〔Ⅰ区〕范围同型阴性对照界定Ⅲ区范围，中间的区域即为Ⅱ区。第十五页，共三十七页。

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根据CD59可以将PNH细胞分为3型1型细胞CD59完全阳性正常细胞2型细胞CD59局部阳性补体中度敏感细胞3型细胞CD59完全阴性补体敏感细胞第十七页，共三十七页。

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CD55和CD59同时局部或完全缺失是PNH的典型表现，单GPI缺失不能确诊。CD59重要性大于CD55单CD55缺乏时并不因此改变红细胞对补体的敏感性而造成溶血CD59的缺失会增加补体的敏感性临床上以CD59缺失作为诊断标准是一个趋势。解决了一切以补体溶血为根底的实验诊断方法在诊断PNH的不确定性意义第二十一页，共三十七页。

其它细胞的PNH检测PNH患者的红细胞、粒细胞、单核细胞及淋巴细胞上GPI锚连膜蛋白局部或全部丧失。粒细胞单核细胞淋巴细胞红细胞骨髓PNH克隆出现比外周血早，网织红细胞略早于红细胞第二十二页，共三十七页。

其它细胞的PNH检测应用FSC/SSC设门分析时会有