一种肿瘤抗原复合物体外致敏DC、T细胞获得肿瘤特异性杀伤细胞CTL及.pdfVIP

一种肿瘤抗原复合物体外致敏DC、T细胞获得肿瘤特异性杀伤细胞CTL及.pdf

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(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN112010960A

(43)申请公布日2020.12.01

(21)申请号202010945524.3

(22)申请日2020.09.10

(71)申请人热休(厦门)细胞生物科技有限公司

地址361000福建省厦门市海沧区生物医

药产业园翁角西路2060号B6楼3层

(72)发明人吴建洪袁婷婷宫雪莲刘博恒

蔡赐猛

(51)Int.Cl.

C07K14/47(2006.01)

C12N5/0783(2010.01)

C12N5/0784(2010.01)

权利要求书1页说明书5页

(54)发明名称

一种肿瘤抗原复合物体外致敏DC、T细胞获

得肿瘤特异性杀伤细胞CTL及其制备方法

(57)摘要

本发明公开了一种肿瘤抗原复合物体外致

敏DC、T细胞获得肿瘤特异性杀伤细胞CTL及其制

备方法。该肿瘤抗原复合物主要由热休克蛋白

gp96和抗原多肽组成,所述的抗原多肽是HER2、

uPAR、GPC3、PEG10、ApoB、ApoE、TRIM28、MUC1、

MMP2、FGF2、c‑Myc和VEGF‑a抗原。本发明采用3天

培养DC法先将DC培养成熟,加入肿瘤抗原复合物

和T细胞共同孵育,直至T细胞成熟。本发明使用

肿瘤抗原复合物体外致敏DC、T细胞产生特异性

肿瘤杀伤细胞CTL可用于治疗多种肿瘤,包括肺

癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、胃癌、乳腺癌等。

A

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2

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1

N

C

CN112010960A权利要求书1/1页

1.一种肿瘤抗原复合物,其特征在于,所述肿瘤抗原复合物由热休克蛋白gp96和抗原

多肽组成,所述的抗原多肽是HER2、uPAR、GPC3、PEG10、ApoB、ApoE、TRIM28、MUC1、MMP2、

FGF2、c-Myc和VEGF-a抗原。

2.所获得的肿瘤特异性杀伤细胞CTL,其特征在于,所述的肿瘤特异性杀伤细胞CTL使

用权利要求1所述的肿瘤抗原复合物体外致敏DC、T细胞而获得。

3.如权利要求2所述的肿瘤特异性杀伤细胞CTL,其特征在于,所述DC细胞采用3天培养

法将其培养成熟。

4.如权利要求2所述的肿瘤特异性杀伤细胞CTL,其特征在于,所述DC细胞、T细胞来源

于自身。

5.如权利要求2所述的肿瘤特异性杀伤细胞CTL,其特征在于,所述肿瘤包括肺癌、黑色

素瘤、肝癌、肾癌、胃癌、乳腺癌等。

6.一种肿瘤抗原复合物体外致敏DC、T细胞获得肿瘤特异性杀伤细胞CTL的制备方法,

包括以下步骤:

(1)肿瘤抗原复合物由体外合成获得,该肿瘤抗原主要由热休克蛋白gp96和HER2、

uPAR、GPC3、PEG10、ApoB、ApoE、TRIM28、MUC1、MMP2、FGF2、c-Myc、VEGF-a抗原多肽组成;

(2)抽取患者外周血,使用淋巴细胞分离液分离获得外周血单个核细胞(PBMC),收集自

体血清;

6

(3)用无血清细胞培养基重悬,调整细胞浓度为2-3×10/ml,接种于150mm的培养皿中,

于37℃、5%CO培养箱中培养;

2

(4)孵育2小时后,轻晃培养皿,收集悬浮细胞用于培养T细胞,贴壁细胞用PBS溶液洗涤

12次,加入含16%自体血清、2%

L-Gln的细胞培养液培养DC;~

6

(5)前一步骤收集悬浮细

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