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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号CN112010960A
(43)申请公布日2020.12.01
(21)申请号202010945524.3
(22)申请日2020.09.10
(71)申请人热休(厦门)细胞生物科技有限公司
地址361000福建省厦门市海沧区生物医
药产业园翁角西路2060号B6楼3层
(72)发明人吴建洪袁婷婷宫雪莲刘博恒
蔡赐猛
(51)Int.Cl.
C07K14/47(2006.01)
C12N5/0783(2010.01)
C12N5/0784(2010.01)
权利要求书1页说明书5页
(54)发明名称
一种肿瘤抗原复合物体外致敏DC、T细胞获
得肿瘤特异性杀伤细胞CTL及其制备方法
(57)摘要
本发明公开了一种肿瘤抗原复合物体外致
敏DC、T细胞获得肿瘤特异性杀伤细胞CTL及其制
备方法。该肿瘤抗原复合物主要由热休克蛋白
gp96和抗原多肽组成,所述的抗原多肽是HER2、
uPAR、GPC3、PEG10、ApoB、ApoE、TRIM28、MUC1、
MMP2、FGF2、c‑Myc和VEGF‑a抗原。本发明采用3天
培养DC法先将DC培养成熟,加入肿瘤抗原复合物
和T细胞共同孵育,直至T细胞成熟。本发明使用
肿瘤抗原复合物体外致敏DC、T细胞产生特异性
肿瘤杀伤细胞CTL可用于治疗多种肿瘤,包括肺
癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、胃癌、乳腺癌等。
A
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6
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1
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2
1
1
N
C
CN112010960A权利要求书1/1页
1.一种肿瘤抗原复合物,其特征在于,所述肿瘤抗原复合物由热休克蛋白gp96和抗原
多肽组成,所述的抗原多肽是HER2、uPAR、GPC3、PEG10、ApoB、ApoE、TRIM28、MUC1、MMP2、
FGF2、c-Myc和VEGF-a抗原。
2.所获得的肿瘤特异性杀伤细胞CTL,其特征在于,所述的肿瘤特异性杀伤细胞CTL使
用权利要求1所述的肿瘤抗原复合物体外致敏DC、T细胞而获得。
3.如权利要求2所述的肿瘤特异性杀伤细胞CTL,其特征在于,所述DC细胞采用3天培养
法将其培养成熟。
4.如权利要求2所述的肿瘤特异性杀伤细胞CTL,其特征在于,所述DC细胞、T细胞来源
于自身。
5.如权利要求2所述的肿瘤特异性杀伤细胞CTL,其特征在于,所述肿瘤包括肺癌、黑色
素瘤、肝癌、肾癌、胃癌、乳腺癌等。
6.一种肿瘤抗原复合物体外致敏DC、T细胞获得肿瘤特异性杀伤细胞CTL的制备方法,
包括以下步骤:
(1)肿瘤抗原复合物由体外合成获得,该肿瘤抗原主要由热休克蛋白gp96和HER2、
uPAR、GPC3、PEG10、ApoB、ApoE、TRIM28、MUC1、MMP2、FGF2、c-Myc、VEGF-a抗原多肽组成;
(2)抽取患者外周血,使用淋巴细胞分离液分离获得外周血单个核细胞(PBMC),收集自
体血清;
6
(3)用无血清细胞培养基重悬,调整细胞浓度为2-3×10/ml,接种于150mm的培养皿中,
于37℃、5%CO培养箱中培养;
2
(4)孵育2小时后,轻晃培养皿,收集悬浮细胞用于培养T细胞,贴壁细胞用PBS溶液洗涤
12次,加入含16%自体血清、2%
L-Gln的细胞培养液培养DC;~
6
(5)前一步骤收集悬浮细
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