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水稻原生质体分离及转化

作者：植物逆境与光合实验室|发表日期：2014-04-11

实验目的：用于做荧光定位、BIFC、Co-IP实验

实验材料和试剂：

生长8-10d的水稻组培幼苗、酶解液、mmg溶液、PEG-CaCl2溶液、W5溶液、5mL移液枪、5mL枪头、12mLBD管、1.5mLEP管、100mL锥形瓶、圆形培养皿、滤网(20mmx20mm)、离心机、摇床等。

溶液的配制：

母液的配制：

1、 0.2MMES(pH5.7)

2、 0.8MMannitol(甘露醇)

3、 1MCaCl2

4、 2MKCl

5、 2MMgCl2

6、 10%BSA

[FlukaPEG400081240]

以下如有上述母液，则都是使用的母液

酶解液：20mL x2

MES 0.5

Mannitol

mL

-35

：『…，

ddH2O

mL

55°C10min

冷却至RT后加入200uLCaCl2

加入200uL10%BSA

Mmg:20mL

MES

mL

Mannitol

mL

MgCl2

mL

ddH2O

mL

7.5

15mL

0.15

0.3g

0.075

0.15g

1.8

3.6mL

x2

0.2

0.4mL

5

10mL

0.075

0.15mL

4.725

9.45mL

PEG-CaCl