病毒学检验完整版本.pdfVIP

绪论

◼病毒是一类光学显微镜下不可见，专性细胞内寄生的非细胞型微生物。

特点：①极小（10~300nm）；②能与细胞受体结合；③酶系统缺失或不全；

④离体条件下以无生命的大分子形式存在；⑤通过复制进行增殖。

形态：多数呈球状或近似球状，少数为杆状、丝状、子弹状，细菌噬菌体呈蝌蚪状。

1.病毒变异包括遗传漂变和遗传转移。

◼遗传漂变由于基因组复制时发生碱基变异所导致，其引起的抗原变异，称为抗原漂变。——持续渐进的

◼遗传转移由于基因组重组（如片段交换）引起。——快速变异（如流感病毒）

第一章细胞培养技术

一、细胞培养技术

◼细胞培养技术是模拟体内生理环境条件，提供细胞适宜的营养和温度条件，在无菌操作的基础上，使立

体组织细胞生长增殖并进行传代的技术。

1.体外培养细胞的组织来源

（1）胚胎或成体组织；（2）正常或肿瘤组织

2.体外培养细胞的生物学特性

（1）细胞异质性：来源于同一组织或不同组织的细胞之间均存在差异。

（2）细胞的增殖与分化

（3）细胞生长特征与形态

①贴壁型生长：形态贴壁依赖性，分为上皮样细胞型（呈不规则多角形）、成纤维细胞型（梭形三角形）

生长接触性抑制→单层生长；密度抑制→停止生长

贴壁过程：重力作用→细胞下沉至瓶底→分泌细胞外基质和黏附分子→贴壁

②悬浮型生长：淋巴细胞、白细胞以及部分肿瘤细胞（黏附分子不表达）

适合于大规模细胞培养，便于细胞传代

3.体外细胞培养生长增殖过程

（1）细胞周期：G1期（DNA合成前期）→S期（DNA合成期）→G2期（分裂前期）→M期（分裂前期）

（2）细胞一代周期：两次传代接种间隔的时间，分为迟缓期、对数期、平衡期和衰亡期。

根据贴壁状况、细胞界限、折光率、胞内颗粒来判断。

（3）细胞的生命周期

原代培养期：从初次培养到第一次传代培养。异质性→单一性

传代培养期：中间

衰亡期：出现细胞凋亡，即细胞程序性死亡。

4.体外培养细胞的基本条件

（1）细胞接种——对数期的细胞

（2）营养物质——天然营养液、合成培养基

①天然培养液——主要为血清（血浆去除纤维蛋白）

作用：提供基本营养与结合蛋白；提供激素及各类生长因子；提供促进细胞壁的蛋白；提供抗损害的保

护性物质；提供蛋白酶抑制物质；提供pH缓冲物质。

②合成培养基——DMEM、MEM、RPMI1640

③无血清培养液

（3）酸碱度——7.0~7.4，主要为CO-NaHCO系统。

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（4）气体——O2和CO2（5%）

（5）温度——35~37℃

（6）水——去离子水或三蒸水（电阻率达到18.2MΩ·cm）

（7）抗生素——青、链霉素或庆大霉素抑制细菌，两性霉素B抑制真菌，卡那霉素抑制支原体

（8）实验室——正压状态（避免外界微生物污染）

（9）其他常用试剂

①平衡盐溶液（BSS）——Hanks、PBS，用于配制细胞生长液和含胰蛋白酶的基础溶液；洗涤组织和细胞。

②消化液——胰蛋白酶、EDTA、胰酶-EDTA消化液（时间过短不能充分解离细胞，过长易损害细胞）

③指示剂——0.4%的酚红溶液

④pH调整液——NaHCO3溶液

5.实验流程

胰酶、EDTA细胞活力检测生长条件

新鲜组织小块/单层细胞→单个细胞（→）→贴瓶→繁殖(5%CO培养)→观察

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6.细胞的冻存、复苏和运输

（1）冻存：对数期细胞、缓慢冰冻避免细胞受到严重损伤。

（2）复苏：快速融化。

7.污染来源

（1）组织：分离的组