T_CVMA 132-2023 丝状支原体山羊亚种实时荧光PCR 检测方法.docxVIP

．ｂ学兔兔ｗｗｗｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载ICS?11.220

．ｂ

学

兔

兔

ｗ

ｗｗ

ｚｆ

ｘｗ

．ｃ

ｏｍ

标

准

下

载

CCS?B?41

团 体 标 准

T/CVMA?132—2023

丝状支原体山羊亚种实时荧光?PCR?检测方

法

Detection?method?of?a?real-time?PCR?for?Mycoplasma?mycoides?subsp.capri

(报批稿)

2023?-?11-?XX?发布 2023?-?11?-?XX?实施

中国兽医协会 发?布

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/CVMA?132—2023

学

兔

兔

ｗ

ｗｗ

．ｂ

ｚｆ

ｘｗ

．ｃ

ｏｍ

标

准

下

载

前??言

本文件按照?GB/T?1.1—2020《标准化工作导则?第?1?部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件涉及专利。

本文件由福建省农业科学院畜牧兽医研究所提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：福建省农业科学院畜牧兽医研究所。

本文件起草人：林裕胜、胡奇林、江锦秀、张靖鹏。

I

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/CVMA?132—2023

学

兔

兔

ｗ

ｗｗ

．ｂ

ｚｆ

ｘｗ

．ｃ

ｏｍ

标

准

下

载

引 言

本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及到条目?5.3?和条目?8.2.2?相关的专

利的使用。

本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。

该专利持有人已向本文件的发布机构承诺，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条

件下，就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可

以通过以下联系方式获得：

专利持有人姓名：福建省农业科学院畜牧兽医研究所

地址：福建省福州市晋安区新店镇埔垱农科院畜牧兽医研究所

请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专

利的责任。

II

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/CVMA?132—2023

学

兔

兔

ｗ

ｗｗ

．ｂ

ｚｆ

ｘｗ

．ｃ

ｏｍ

标

准

下

载

丝状支原体山羊亚种实时荧光?PCR?检测方法

1??范围

本文件规定了丝状支原体山羊亚种实时荧光PCR检测方法。

本文件适用于丝状支原体山羊亚种核酸的检测。

2??规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T?6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB?19489 实验室?生物安全通用要求

NY/T?541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3??术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4??缩略语

下列缩略语适用于本文件。

实时荧光PCR：实时荧光聚合酶链式反应（Real-time?polymerase?chain?reaction）

Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值所经历的循环数（cycle?threshold）

DNA：脱氧核糖核苷酸（Deoxyribonucleic?acid)

PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphate?buffered?saline)

Mmc：丝状支原体山羊亚种（Mycoplasma?mycoides?subsp.?capri）

tm值：解链温度（Melting?temperature）

5??试剂和耗材

5.1?试剂

5.1.1??无核酸酶水：2℃~8℃保存。

5.1.2??75%乙醇：用无水乙醇和无核酸酶水配制，-20℃预冷。

5.1.3??DNAzol：2℃~8℃保存。

5.1.4??8?mmol/L?NaOH?溶液：配制方法按附录?A?中?A.1。

1

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/CVMA?132—2023

学

兔

兔

ｗ

ｗｗ

．ｂ

ｚｆ

ｘｗ

．ｃ

ｏｍ

标

准

下

载

5.1.5??30%甘油磷酸盐缓冲液：配制方法按附录?A?中?A.2。

5.1.6??阳性对照、阴性对照见附录?A?中?A.3?和?A.4，其中阳性对照靶基因序列及质粒制备见附录?B?中

B.1?和?B.2。

5.1.7??0.01?mol/L?PBS?溶液：配制方法按附录?A?中?A.5。

5.1.8??SYBR?Premix?Ex?TaqTM?Ⅱ（Perfect?Real?Time）荧光染料预混酶：内含?TaKaRa?Ex?TaqTM HS，

dNTP?Mixture，Mg2+和?SYBR??Green?I。可采用等效商品化试剂。

注：除非另有说明，所有试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T?6682的