一种过表达稳转细胞株的快速构建方法及其应用.pdfVIP

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2024-03-27 发布于四川
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一种过表达稳转细胞株的快速构建方法及其应用.pdf

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本发明公开一种过表达细胞株的快速构建方法，本发明采用CRISPR/Cas9一体化载体与供体质粒对宿主细胞进行共转染，通过2个sgRNA分别对待敲入质粒(供体质粒)的AmpR基因和宿主细胞特定基因位点HPRT基因同时进行切割，通过诱导非同源末端连接(NHEJ)修复的方式实现全质粒定点整合，无需二次载体构建，无需线性DNA片段转染，即可快速获得目的序列稳定表达的细胞株，构建时间短，实验成本低，且商品化的AmpR抗性质粒易于获得，非常适用于突发公共卫生事件急需过表达细胞株以及分子实验技术相对薄弱的科研

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN117757840A

(43)申请公布日2024.03.26

(21)申请号202311654097.3C12N15/12(2006.01)

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