12阳性克隆的PCR鉴定.ppt

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2024-03-31 发布于四川
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12阳性克隆的PCR鉴定.ppt

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取1ml菌液6000rpm离心3min，弃去900ul上清液，利用剩余上清弹匀沉淀，沸水浴15min，12000离心5分钟，取上清液进行PCR检测。**12.阳性克隆的PCR鉴定一、实验目的掌握利用PCR技术对阳性克隆的检测技术三、实验材料、器具及药品实验器具

微量取液器(10μl,20μl)，台式高速离心机，PCR仪。实验材料待检测的阳性克隆菌株.

实验药品10×PCR缓冲液(含Mg2＋)dNTP(每种2.5mmol)Taq酶2U/ulDNA模板引物RV-M：GAGCGGATAACAATTTCACACAGG(Tm=54℃)引物M13-47：CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC(Tm=54℃)引物溶液浓度10pmol/ul四、实验步骤?体积模板2引物11引物2110×PCRBuffer2Taq酶0.4dNTPs1ddH2O12.6Total20在0.2mlRCR管内配置20ul反应体系：?每管2555511022556931899055管扩增产物进行电泳检测:混匀后离心，进行PCR扩增.(94℃预变性5min，94℃变性30sec，54℃退火30sec，72℃延伸45sec,循环25次,72℃延伸10min。)*