粮食中镰刀菌属真菌菌落及显微形态特征观察操作方法、常见镰刀菌真菌菌落和显微形态特征描述、培养基和试剂.pdfVIP

GB/T26628.3—XXXX

附录A

（规范性）

粮食中镰刀菌属真菌菌落及显微形态特征观察操作方法

A.1设备和材料

A.1.1显微镜：放大倍数宜在1000倍，内置光源，强度可调，宜具备数码照相功能，数码照相机的分

辨率宜在300万像素以上。

A.1.2目镜测微计：具有10倍的双目镜。

A.1.3物镜：配备10倍、20倍、40倍、100倍(油镜)。

A.1.4生物培养箱。

A.1.5冰箱。

A.1.6生物安全柜。

A.1.7放大镜。

A.1.8酒精灯。

A.1.9接种钩针。

A.1.10解剖针。

A.1.11滴瓶。

A.1.12三角瓶。

A.1.13载玻片。

A.1.14盖玻片。

A.1.15培养皿。

A.1.16镊子。

A.1.17高压蒸汽灭菌器。

A.2培养基和试剂

A.2.1马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：成分和制法见附录C.1。

A.2.2麦芽汁琼脂培养基(MEA)：成分和制法见附录C.2。

A.2.3乳酸-苯酚固定液：成分见附录C.3。

A.3操作方法

A.3.1菌落特征观察

A.3.1.1用种植分离法或稀释分离法把粮食籽粒上的真菌分离并纯化，将纯化后的菌株保存于培养皿

中（或斜面试管中）备用。

A.3.1.2将分装于250mL或500mL三角瓶中已灭菌的培养基（A.2.2和A2.3）熔化，并冷却至45℃

左右备用。

A.3.1.3将熔化培养基在生物安全柜（A.1.6）中以无菌操作倾注于直径9cm的已灭菌的培养皿（A.1.15）

中，每个培养皿注入15mL～30mL培养基，凝固后备用。

A.3.1.4将接种针（A.1.9）经火焰灼烧灭菌、冷却后，从纯化后菌落中（A.3.1.1）挑起少量孢子或菌

丝，点种于培养皿中的培养基上，接种一点或三点。将接完菌种的培养皿放置于霉菌培养箱（A.1.4），

于28℃±1℃下培养7d。

A.3.1.5肉眼或借助放大镜观察菌落的生长或发育速度、菌落颜色、菌落表面质地、菌落边缘、培养

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基颜色变化等。

A.3.2显微形态特征观察

A.3.2.1取一片无菌的载玻片（A.1.13），在中央滴一滴70%的酒精，用接种针（A.1.9）或解剖针（A.1.10）

从培养皿（A.3.1.5）的纯化菌落上挑取少许含有培养物结构于70%的酒精滴中，切忌涂抹，以免破坏

真菌结构。

A.3.2.2酒精挥发后，加一滴乳酸苯酚液固定液（A.2.1）并盖上盖玻片。如用于短暂观察，可用蒸馏

水取代乳酸苯酚固定液。如盖玻片和载玻片中间有气泡，可在酒精灯（A.1.8）上微微加热排除气泡。

制片操作应在生物安全柜（A.1.6）内完成，避免孢子飞扬污染环境。

A.3.2.3制备好的玻片置于显微镜（A.1.1）下，观察真菌菌丝、产孢结构、分生孢子等特征。

A.4观察结果

A.4.1将A.3.1.4的观察现象与第5章的菌落形态标准图对照，确定菌的种类。

A.4.2将A.3.2.2的观察现象与第5章的显微形态标准图对照，确定菌的种类。

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附录B

（资料性）

常见镰刀菌真菌菌落和显微形态特征描述

B.1禾谷镰刀菌（F.graminearum）（图1、图2、图3）

菌落特征：28℃±1℃培养7d，菌落在PDA培养基上直径大于9.0cm，长满整个平板，气生菌丝

旺盛，为棉絮状，颜色为黄色至棕色，菌落背面为黄褐色。生长时间较长时，菌落可产生紫红色的色素，

呈现紫红色；菌落在MEA培养基上大于9.0cm，长满整个平板，菌落正面为浅驼色或土黄色，反面均

为粉红色，菌丝棉絮状。

显微形态特征：产孢细胞为单瓶梗，缺乏小型分生孢子。