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IL-18在内毒素血症或出血所致急性肺损伤肺内的表达

出血和内毒素血症是急性肺损伤进展的重要危险因素。IL-18是新近发现的细胞因子，

成熟期释放，其活性形式由IL-1转换酶（ICE）的酶切作用于前IL-18而形成。IL-18具有

多种免疫调节作用，包括促进IFN-γ，IL-1β，TNF-α和细胞间黏附分子-1（IDM-1）的产生。

为检测IL-18在急性肺损伤的作用，我们在内毒素血症和出血的动物模型中检测IL-18的表

达，同时检测IFN-γ，IL-1β，TNF-α和细胞间黏附分子-1的表达。出血和内毒素血症后肺

IL-18mRNA水平增加。但是只有内毒素血症模型的肺及血浆IL-18蛋白浓度升高。ICE的

表达在内毒素血症中增高，但出血模型中未增高。IFN-γ的表达在两者中均增加，肺组织IL-12

mRNA水平仅在内毒素血症中增加。这些结果表明出血和内毒素血症导致肺中免疫调节细

胞因子表达为两个不同的模式。并且，两者肺中ICE表达的差异可能影响下游细胞因子活

性形式的产生，包括IL-18。出血后肺内IFN-γ的表达可能通过不依赖IL-12和IL-18的途径

进行。IL-18可能在调节内毒素血症所致急性肺损伤的发展过程中起重要作用，但是与出血

所致的损伤无明显关系。

急性肺损伤（ALI）和其最严重的表现形式，急性呼吸窘迫综合征（ARDS），每年在美

国大约有15万人发病。感染和出血是两种主要的，公认的易导致ALI发生发展的诱因。内

毒素血症或出血可引起多种前炎症细胞因子表达的增加，包括小鼠肺细胞内的TNF-α，

IL-1β，IL-1α，IFN-γ，巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)，以及出血后支气管肺泡灌洗液（BALF）

中TNF-α和IFN-γ水平的增加。这些实验结果与临床ARDS患者体内IL-1β，IL-8，TNF-α

和IL-6水平和接受机械通气治疗的患者对照升高相一致。近来有研究发现，ARDS患者BALF

中前炎症因子活性较血浆中显著增高，提示肺是炎症发生的主要地点。

IL-18，亦称为IFN-γ诱导因子，最初在肝枯否细胞中分离。IL-18在肺，皮肤，骨骼肌，

肾和胰腺中有表达。体内试验发现，IL-18可增加IL-1β,TNF-α,IL-8,IL-2的表达，降低

GM-CSF和IL-10的表达，上调细胞间黏附分子-1的表达，促进T-细胞增殖，通过Fas-配体

介导的途径增加NK细胞活性，还能在肿瘤模型中减少新生血管。

类似前IL-1β，前IL-18缺少信号序列，需要剪切才能形成其成熟和活性形式，以成熟

的有活性形式分泌。在这个过程中起主要作用的是ICE。

内毒素血症是急性肺损伤的重要危险因素，IL-18在其基础病理生理过程中起重要作用。

最近，研究发现IL-18受体敲除小鼠与野生型相比对内毒素血症有抵抗作用。然而，关于内

毒素血症及其他炎性过程如失血时肺内IL-18表达的动力学改变目前未知。因此，我们研究

了内毒素血症和出血时肺内IL-18和ICE的表达。因为IL-12和IL-18对于诱导IFN-γ的表

达有重叠作用，我们还检测了内毒素血症和出血时IL-12和IFN-γ的表达。

方法和材料

动物

雄性BALB/c小鼠，8-12周龄，HarlenSpragueDawley(Indianapolis,IN)提供，美国科罗

拉多州健康科学中心动物照料处饲养。实验动物12小时白天/黑夜循环任意接触食物和水。

内毒素血症和出血模型制备

动物模型的制备之前已经由本实验室描述。两种模型均在72小时内出现ALI发作，表

现在肺内中性粒细胞浸润，肺间质水肿，肺泡内分泌蛋白样物质。

内毒素血症小鼠模型的制备：腹腔内注射0.2mlPBS稀释的脂多糖（大肠杆菌0111：

B4；Sigma,St.Louis,MO）25mg/kg，对照组腹腔注射0.2mlPBS。出血模型小鼠模型：甲氧

氟烷麻醉后通过心脏穿刺放出小鼠体内总血量的30%（20g小鼠为0.55ml），用此方法的总

死亡率12%，心包内无渗血，无血胸及肺或心脏挫伤。对照组麻醉后心脏穿刺但不放血。

肺分离和BALF收集

在预定时间点，小鼠麻醉后通过心脏穿刺抽血。血液收集在肝素化注射器中（含5U肝

素）