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诺如病毒实验室检测

诺如病毒实验室检测

诺瓦克病毒（NorwalkViruses，NV）是人类杯状病毒科

(HumanCalicivirus，HuCV)中诺如病毒（Norovirus,NV）属的原型

代表株。NV是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。诺瓦克病

毒最早是从1968年在美国诺瓦克市暴发的一次急性腹泻的患者粪便中

分离的病原。2002年8月第八届国际病毒命名委员会批准名称为诺如

病毒（Norovirus,NV）。诺如病毒与在日本发现的札幌样病毒

（Sapporo-likeVirus，SLV），正式名称为札如病毒(Sapovirus,SV)，

合称为人类杯状病毒。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，

全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现

高发。

诺如病毒抗体没有显著的保护作用，尤其是没有长期免疫保护作

用，极易造成反复感染。诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通

过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、

医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。诺如病毒有许多共

同特征：直径约为26～35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面

体对称；从急性胃肠炎病人的粪便中分离，不能在细胞或组织中培养，

也没有合适的动物模型；基因组为单股正链RNA；在氯化铯密度梯度

中的浮力密度为1.36～1.41g/cm3；电镜下缺乏显著的形态学特征，

负染色电镜照片显示，NV是具有典型的羽状外缘，表面有凹痕的小圆

状结构病毒。

诺如病毒根据遗传性分为5个基因组，至少有29个基因群，其中

基因组I（GGI）有8个基因群，基因组II（GGII）有17个基因群，

基因组III（GGIII）有2个基因群，基因组IV（GGIV）和基因组V

（GGV）各有1个基因群。与人类有关的主要是GGI、GGII和GGIV。

一、标本采集注意事项：

粪便标本应在发病首日采集，至多不能超过发病急性期(48～72h)，

此时为稀、软便，病毒排出量最多。一次流行，至少采集10例患者粪

便，每份标本量约1～5ml，成形便和肛拭子诊断意义很小。标本置4℃

可存放2～3周，运送也要低温条件。病人呕吐物是粪便标本的最佳补

充，有助于病原的诊断。该标本的采集、储存和运送条件同于粪便。

从流行病学角度出发，在水、食物或其它外环境标本中检出NV意义

重要。需注意检测技术要锁定在高度怀疑的传播媒介上，尽早采样并

置4℃存放，若是饮用水，需用大容量(5～100L)浓集病毒后检测。

二、实验室检测：

1、电镜检查：电镜法分直接电镜法(EM)和免疫电镜法(IEM)，

EM法观察的灵敏

度较低，要求每毫升粪便样品中至少有大约106个病毒粒子，因

此只能用于患病早期病毒大量排出时采集的样本检测。IEM法比EM

法的敏感性可提高100倍，主要应用患者恢复期血清捕捉同型抗原，

从而增加检出率。电镜法的缺陷在于设备昂贵，不能广泛普及；检测

结果与操作者的技能和经验有直接关系；灵敏度相对较低；不适于大

规模流行病学调查。

2、免疫法：免疫法包括放射免疫法(RIA)、生物素-亲和素免疫法

(Biotin-Avidin

Immunoassy)和酶联免疫法(ELISA)。RIA法的灵敏度比IEM法可

提高10～100倍，可以检测出抗体升高的水平，为流行病学提供更有

参考价值的资料。RIA法的不足之处在于它需要6d，且需要放射性同

位素标记。为了简化方法，美国疾病预防控制中心建立了生物素-亲和

素免疫法，其灵敏度与RIA法相当，该方法已成为美国疾病预防控制

中心检测NLV抗原和抗体的标准实验方法之一。1992年Jiang等重

组杆状病毒表达NV衣壳蛋白成功后，建立起的NV酶联免疫检测方

法快速、灵敏、经济，其不足之处是免疫反应的株型特异性太强，所

以应用范围还比较窄。酶链免疫法特异性强，灵敏度高，诊断迅速，

且较经济，是可广泛应用的检测方法。

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