原创力文档- 1、本文档共6页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
实用文档
现象原因解决
反影(白色条带,黑色背景)1HRP过高(背景较高)至少成倍稀释一抗/二抗(可4~10倍)*注1
显影后膜上条带处变为黄色2HRP过高(敏感性太高)至少成倍稀释一抗/二抗(可4~10倍)*注2
信号弱或无3HRP过高引起底物迅速耗竭至少成倍稀释一抗/二抗(可4~10倍)*注3
4抗体-抗原系统敏感性过低提高抗体浓度/蛋白上样量*注4
5转膜不充分/过转优化转膜条件*注5
6HRP或底物活性降低测试活性或选用敏感底物*注6
高背景7HRP过高(背景较高)至少成倍稀释一抗/二抗(可4~10倍)*注7
8闭时间不足延长闭时间4度过夜最好*注8
9抗体与闭液有交叉更换闭液(如3%BSA的TBST)*注9
10TBST洗脱不足增加洗脱时间、次数、用量*注10
11暴光时间过长降低暴光时间*注11
12抗原-抗体浓度过高降低抗体浓度或蛋白上样量*注12
条带内无显影的白点13转膜不良（如有气泡在胶-膜之间)精细操作*注13
14膜平衡不均/油脂污染按说明书平衡膜/戴手套用平头镊子持膜*注14
15膜与X光片间有气泡显影前去除气泡*注15
非特异性条带16抗体交叉反应至少成倍稀释一抗/二抗(可4~10倍)*注16
17SDS非特异性结合蛋白条带使用无SDS转膜液*注17
散在小圆斑18闭液有杂质颗粒静置牛奶使大颗粒沉淀，仅用上层*注18
*注1其具体问题有二：一是背景较高,二是没有条带.形成机制为条带处HRP很快将底物耗竭，则不发光不使胶片感光而为白色,周围因背景HRP较低而
持续发光一段时间使胶片感光为黑色。这种常见于高浓度抗体并且闭/洗脱不好的情况下。如果没有背景则就是原因3的现象。在暗室可以看到
文案大全
实用文档
条带周围荧光而条带处为暗。如是则要么通过降低抗体解决，要么动作迅速早期未耗竭底物时压片，否则一旦耗竭通过减少压片时间不能解决问
题。也可以过一段时间鼿RP稍减后重加底物迅速压片。还有另外一种反影现象就是压出条带粗大模糊，但条带中心是空的白色，原因和上面的一
样，主要是条带中心耗竭底物引起的，也可以在暗室看到中空的荧光带，但与上面的区别主要在于特异性要好一些，若继续发展则就是原因3的
现象。其分析和解决同上。
*注2其原因主要是HRP太高超速催化底物生成的产物使膜发黄,压出的片子可
文档评论（0）