【医学免疫学实验】血浆凝固酶实验与肥大氏反应实验.ppt

目录末页*强调：1.滴管的使用方法，每组发4支，其中2支为公用，用来取生理盐水和菌液，用完后插入相应试剂管中。2.一定要混匀，用滴管混匀时，吸时不要用力过猛，以免将液体吸入橡皮头内，吹时不可将液体完全吹净，以免产生过多气泡，影响定量。3.按顺序加样，不可颠倒4.伤寒菌液尽量避免洒出。5.各组记好时间6.取出时，不可晃动试管，轻拿轻放。**血浆凝固酶实验与肥达氏反应实验医学微生物学实验目录一血浆凝固酶实验二、肥达氏反应实验熟悉血浆凝固酶试验的意义。目的：一血浆凝固酶实验材料：菌种：金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌其他：新鲜兔血浆(或人血浆)、NS等纤维蛋白原+结合型血浆凝固酶不溶性纤维蛋白玻片法原理：一血浆凝固酶实验细菌形成凝块黏附于细菌液态纤维蛋白原试管法原理：一血浆凝固酶实验游离型血浆凝固酶凝血酶样物质协同因子固态纤维蛋白凝固充分混合，观察结果。结果：阳性——无法混匀，细菌在血浆中聚集成团块；阴性——呈均匀混浊；血浆+NS+细菌1血浆+NS+细菌2方法：一血浆凝固酶实验金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌意义：鉴定致病性与非致病性葡萄球菌。目的：二、肥达氏反应实验1、掌握肥达试验的原理，操作方法及结果判断。2、熟悉其临床意义。一、肥达氏反应实验材料：1．标本感染待测血清（稀释度1：20）。2．试剂伤寒沙门菌菌体抗原（O）及鞭毛抗原（H）、甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原及乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原。3．其他微孔反应板、50μl移液器、吸头、水浴箱等。原理：一、肥达氏反应实验（1）在微孔反应板编号4排6列。（2）每孔加入生理盐水50μl。（3）吸取待检血清50μl加入每排第1孔，连续倍比稀释到第5孔。从第5孔吸出50μl弃去。第6孔为对照管。这样每排从第1孔至第5孔的血清稀释度为1：40,1：80,1：160，1：320,1：640。（4）每排每孔加入对应的伤寒菌液50μl。（5）混匀，置于52℃水浴箱中1h后观察。方法：二、肥达氏反应实验50实验方法5050505050505050501:401:801:1601:3201:64050弃掉1234550650NS(μl)待测血清对照管50505050①②③④灭活的伤寒菌液50μl50μl50μl50μl50μl50μl抗体稀释度彻底混匀52℃,1h二、肥达氏反应实验结果：先观察对照管，应无凝集现象。“++++”—细菌全部凝集，液体清澈，孔底形成大片凝集物。“+++”—细菌大部分凝集，液体澄清，孔底明显凝集物。“++”—细菌部分凝集，液体半澄清，孔底有明显凝集物“+”—少量细菌凝集，液体较混浊，孔底少量凝集物。“-”—液体混浊，细菌无凝集。与对照孔相同。二、肥达氏反应实验效价（滴度）的判定：产生明显凝集反应（++）的最高血清稀释度为血清中所测抗体的效价。效价愈高，表示血清中所含该抗体愈多。如血清的最低稀释度仍无凝集，或血清效价低于1：80，则为阴性，应报“1：80”；如果血清的最高稀释度1：1280仍呈“++”或更强凝集，则血清效价应报“1：1280”。二、肥达氏反应实验234561:401:801:1601:3201:640+++++++++--管号血清稀释度结果该血清抗体效价?该血清抗体效价1:160例一:234561:401:80