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双萤光素酶报告（miRNA靶验证）实验
4.实验步骤
实验共分以下3个主要步骤：
1.质粒转染细胞；2.双报告；3.统计学分析。
1.质粒转染细胞：
(1)细胞铺板：将细胞按70%的汇合度接种到96
(2)转染：16小时后转染萤光素酶报告质粒和RNA，每个样品
设置6个复孔
1)配制和转染试剂:96转染质粒时每孔比例Firefly：
Renilla：转染试剂=0.1μg：0.01μg：0.25μl
2)配制RNA和转染试剂稀释液，RNA的终浓度为100nM，转染
试剂每孔0.25μL
3)稀释好的和RNA及转染试剂，常温孵育5min
4)将稀释好的和RNA分别和转染试剂混匀，常温孵育20min
5)每孔弃去50ul培养基，将25μL转染混合液和25uLRNA
转染混合液分别添加到每孔细胞样品中，
6)转染6小时后，换新鲜完全培养基
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