毛细管电泳法.pptVIP

第31页,共54页，2024年2月25日，星期天3.缓冲液池化学惰性，机械稳定性好；4.检测器要求：具有极高灵敏度，可柱端检测；检测器、数据采集与计算机数据处理一体化；类型检测限/mol特点紫外-可见10-13～10-15加二极管阵列，光谱信息荧光10-15～10-17灵敏度高，样品需衍生激光诱导荧光10-18～10-20灵敏度极高，样品需衍生电导10-18～10-19离子灵敏，需专用的装置；第32页,共54页，2024年2月25日，星期天二、毛细管电泳的进样方式进样量：毛细管长度的1%-2%；纳升级、非常小；1.流体力学进样方式（1）进样端加压（2）出口端抽真空（3）虹吸进样第33页,共54页，2024年2月25日，星期天毛细管一端插入样品瓶，加电压；2.电动进样方式进样不均：电歧视现象，淌度大的离子比淌度大的进样量大；离子丢失：淌度大且与电渗流方向相反的离子可能进不去；特别适合黏度大的试样。3.扩散进样试样通过扩散作用进入分离柱端口处。第34页,共54页，2024年2月25日，星期天第四节毛细管电泳类型常用的六种电泳分离模式；根据试样性质不同，采用不同的分离类型；每种机理的选择性不同；第35页,共54页，2024年2月25日，星期天一、毛细管区带电泳

（Capillaryzoneelectrophoresis,CZE）带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出；中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出；阴离子：两种效应的运动方向相反；ν电渗流ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离。CZE是最基本、应用广的分离模式；第36页,共54页，2024年2月25日，星期天二、毛细管凝胶电泳

Capillarygelelectrophoresis，CGE将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模式很难分离，采用CGE能获得良好分离，DNA排序的重要手段。特点：抗对流性好，散热性好，分离度极高。无胶筛分技术：采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备。第37页,共54页，2024年2月25日，星期天1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。三、胶束电动毛细管色谱（MECC，MEKC）

Micellarelectrokineticcapillarychromatography,MEKC在电场力的作用下，胶束在柱中移动。第38页,共54页，2024年2月25日，星期天2.电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流ν电泳，负电胶束以较慢的速度向负极移动；5.色谱与电泳分离模式的结合。3.中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长；4.可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围；第39页,共54页，2024年2月25日，星期天根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术；2.毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8.0kV）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度；3.氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零；四、毛细管等电聚焦

Capillaryisoelectricfocusing,CIEF第40页,共54页，2024年2月25日，星期天4.聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离；5.阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀NaOH溶液；6.加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测；7.电渗流在CIEF中不利，应消除或减小。第41页,共54页，2024年2月25日，星期天1.将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，