单克隆抗体制备步骤及注意事项.docx

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单克隆抗体制备步骤及注意事项

一、脾细胞的准备：

.将Balb/c小鼠拉颈脱臼处死，浸泡于75%酒精3~5min。无菌操作取出脾脏，置于盛有5mL不完全培养液的平皿中，洗涤3次去除脾脏表面的脂肪和结缔组织。

.将洗好的脾脏用剪刀剪成3~5个小块，然后将脾脏研碎，过细胞筛，收集细胞。

.将脾脏细胞悬液在1000r/min条件下，离心5min，弃上清。再以同样的方法洗涤离心一次。

.将沉淀细胞重新悬浮于10mL不完全培养液中，计活细胞数，取108个脾淋巴细胞悬液备用。

注意事项：

免疫脾细胞一般取最后一次加强免疫3天以后的脾脏，制备成细胞悬液，因为此时B淋巴母细胞比例较大，融合的

该用户很懒，什么也没介绍

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