液相色谱仪使用方法.ppt

关于液相色谱仪使用方法一、什么是色谱色谱是一种分离工具，而不是传统意义上的分析仪器。色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为色谱分析法。常见的分离方法：蒸馏、离心、电泳、过滤、超滤、等等。色谱法的发明人：俄国科学家：麦克海尔.塞蒙诺维奇.维茨特M.S.Tswett第2页,共21页，2024年2月25日，星期天二、什么是液相色谱呢液相色谱：流动相是液相液相色谱柱色谱纸色谱HPLC薄层色谱第3页,共21页，2024年2月25日，星期天三、什么是高效液相色谱HighPerformanceLiquidChromatography高效液相色谱法，简称：HPLC是一种区别于经典液相色谱；基于仪器方法的高效能分离手段。具有高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵敏度的检测器。第4页,共21页，2024年2月25日，星期天HPLC的分离原理、仪器配制和工作流程分离原理动画演示溶剂色谱泵进样器HPLC色谱柱检测器废液数据处理系统请单击请单击请单击请单击请单击第5页,共21页，2024年2月25日，星期天四、高效液相色谱法的特点“三高一广一快”：①高压：对载液加高,流动相能迅速通过色谱柱压.②高效：分离效能高。③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在uL数量级。④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析。⑤分析速度快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15—30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。第6页,共21页，2024年2月25日，星期天五、高效液相色谱法的主要类型及原理1、液-液分配色谱2、液-固吸附色谱3、离子交换色谱4、离子对色谱5、离子色谱6、排阻色谱7、亲和色谱(AC)第7页,共21页，2024年2月25日，星期天1、液-液分配色谱固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相normalphase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相reversephase）。正相与反相的出峰顺序相反；固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C18柱（反相柱）以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。第8页,共21页，2024年2月25日，星期天反相高效液相色谱法即指流动相的极性大于固定相极性的色谱方法。在本法中常采用化学键合相作为固定相，流动相采用水—甲醇或水—乙腈系统，在反相色谱中，极性强的组分在分离时先流出柱子，极性弱的组分后流出。因此适合于共存组分极性差异较大的样品分析。第9页,共21页，2024年2月25日，星期天乙腈(jīng)乙腈又名甲基氰，分子式CH3CN，无色透明液体，密度小于水，约为0.79，能与水和乙醇等有机溶剂以任意比混溶，易燃，有毒性。第10页,共21页，2024年2月25日，星期天2、液-固吸附色谱基本原理：各组分在固定相吸附剂上竞争性吸附与解吸固定相：固体吸附剂为硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。特点：适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；缺点：非线形等温吸附，常引起峰的拖尾第11页,共21页，2024年2月25日，星期天六、色谱柱液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3-10μm的范围内.另一类正相填料是硅胶表面键合-CN,-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的(C18)非极性填料。也有无定型和球型之分。常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10μm之间。第12页,共21页，2024年2月25日，星期天1.色谱柱的选择第13页,共21页，2024年2月25日，星期天2.本公司使用的柱子主要特点:使用过程中柱压稳定，即使长时间使用也不会出现拖尾等异常情况使用寿命长，清洗频度低，仅为同类产品的15%第14页,共21页，2024年2月25日，星期天七、样品的前处理a、最好使用流动相溶解样品。b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆