流式细胞仪简介和使用方法.ppt

第三步建立一CD45/SSC双参数点图将以上CD34阳性细胞显示于其中在其中设门R3门去除CD34阳性颗粒中的聚集血小板淋巴细胞和单核细胞第64页,共83页，2024年2月25日，星期天第四步将R3门中圈定的细胞显示在FS/SS图中以检测细胞是否落在平时的幼稚淋巴细胞门R4中通过R4要去除比淋巴细胞小的颗粒第65页,共83页，2024年2月25日，星期天第五步如何确定R4门的位置呢？方法如下在CD45/SSC双参数点图中设立R5门圈定CD45强阳性且SSC低信号的淋巴细胞群体将R5门中的细胞显示在R4门所在的FS/SS双参数直方图中根据其中的淋巴细胞的位置调节R4门确定R4门在FS和SS轴上最小值的最低范围第66页,共83页，2024年2月25日，星期天第六步R1门在CD45从标的下限则根据以下直方图来确认建立第5张CD45/CD34双参数直方图根据CD34阳性颗粒的CD45表达的最小值建立十字门确保所有CD34阳性CD45极弱表达的细胞全部在CD45设定界线的左侧然后根据此进的CD45界线位置确定R1门的最小值第67页,共83页，2024年2月25日，星期天第七步绝对计数：对于普通流式细胞仪在样本中加入标准微球，校准流式细胞的计数，从而得出干细胞的浓度Partec流式细胞仪所有检测指标均为绝对计数，无需校准微球，计数过程由硬件完成。第68页,共83页，2024年2月25日，星期天阴性对照对于阳性细胞数很少的样本，如何建立有效的阴性对照是值得考虑的问题第69页,共83页，2024年2月25日，星期天流式细胞仪数据保存及分析所有商业流式细胞仪样本分析结果数据包均以FCSII格式保存无论操作平台是DOS、Windows、MAC，流式数据文件均可被自由拷贝流式数据包含有各项参数信息及分析颗粒信号信息第70页,共83页，2024年2月25日，星期天功能强大的免费分析软件：PC版WinMDI提供流式软件分析所需的所有功能，运行在Windows平台可在任何PC机上分析流式数据并输出报告下载：第71页,共83页，2024年2月25日，星期天第三部分

临床流式细胞仪应用简介以下将简单地、举例性地介绍流式细胞可开展的部分项目。只须掌握了流式细胞仪的原理及操作软件，您可开展任何基于荧光技术的检测项目流式细胞仪是一种任您自由展开想像力的、非凡的检测工具第72页,共83页，2024年2月25日，星期天DNA倍体分析：DNA分析是流式细胞仪最初且是现在应用最广检测项目。由于恶性细胞DNA含量通常与正常细胞不同，存在异倍体细胞，所以现有很研究评价异倍体细胞与肿瘤恶性度及其预后的关系。DNA含量检测还可提供细胞周期方面的信息，这在细胞生物学中运用很广泛。特别地，它可表示出细胞毒性药物对细胞作用过程。这些DNA检测还可与细胞表面标志物标记同时进行，这样在细胞混合培养中，可通常追踪表达特异标志物的细胞显示其生长周期情况。所有方法都是基于染料能与核酸起特异的化学反应并发射出荧光，常用的染料为PI，DAPI。流式细胞仪要求：488nm光源，575nm滤光片。第73页,共83页，2024年2月25日，星期天细胞生存能力实验，使用Heochest33342染料与DNA特异性结合，后因细胞活力不同染料的结合程度也各异，故可评估细胞的活性度。流式细胞仪要求：360nm光源，455nm滤光片计数外周血中检测网织红细胞：使用TO染料能够特异性地与RNA结合，结合系数高达3000，故具有很好的信噪比。流式细胞仪要求：488nm光源，525nm滤光片，液量绝对计数系统第74页,共83页，2024年2月25日，星期天血小板自身抗体检测：血小板自身抗体识别人血小板抗原，会引起各种临床相关症状，如新生儿自免性血小板减少症、输血后紫癜、难治性血小板减少。流式细胞可快速准确地检测血小板自身抗体。FITC标记抗人免疫球蛋白抗体、PE标记识别血小板抗体。仪器要求：488nm光源，525nm、575nm滤光片移植交叉配型：原细胞毒实验，主要用于避免移植物超急性排拆反应。流式细胞仪用于监测T或B细胞是否受到受体血清中免疫球蛋白攻击，作为HLA配型前的预实验。流式细胞仪因其高精确性已成为该领域内的金标准。FITC标记抗人免疫球蛋白抗体、PE标记识别T细胞CD3或B细胞CD29抗体。仪器要求：488nm光源，525nm、575nm滤光片第75页,共83页，2024年2月25日，星期天检测细胞经抗原或细胞有丝分裂刺激后活化效应：淋巴细胞早期活化指标CD69可用来检测免疫治疗效果。流式细胞使用三色分析可监测淋