液相色谱柱的应用.ppt

液相色谱柱:ZORBAXEclipseXDB-C18色谱柱尺寸:4.6x250mm5μmUV:254nm流速:1mL/min.UracilButylparabenNaphthaleneDipropylphthalateAcenaphthene尿嘧啶尼帕尔金丁酯萘二丙基邻苯二甲酸酯苊刻度混合:比例阀A:水B:甲醇,用泵抽取50%B体积比混合:V/V250mL水+250mL甲醇,用泵抽取100%混合液定容混合:250mL甲醇,用水定容至500mL,用泵抽取100%混合液重量比混合:(w/w)200g甲醇+200g水,用泵抽取100%混合液流动相配比的影响第95页,共111页，2024年2月25日，星期天等度和梯度的影响色谱柱：DionexacclaimC18，250*4.6mm，柱温：25℃，波长：203nm流速：1.0ml/min样品：人参皂苷Rg11.等度：乙腈：水（22：78）为流动相2.梯度：乙腈：水为流动相0min20:8020min40:60第96页,共111页，2024年2月25日，星期天等度和梯度获得柱效不同柱效2.1万柱效6万第97页,共111页，2024年2月25日，星期天液相色谱柱的应用六、色谱柱的维护第98页,共111页，2024年2月25日，星期天色谱柱的保存系统及填料储存溶剂正相系统(SiO2,CN,NH2)正己烷反相系统(C18,C8,C4,C6H6)纯甲醇或纯乙腈特殊填料(手性,专用柱)按说明书规定要求第99页,共111页，2024年2月25日，星期天色谱柱的保存短期不用必须冲洗干净后保存.长期不用每隔2~3个月冲洗一次防止碰撞和强烈振动第100页,共111页，2024年2月25日，星期天色谱柱的维护保养购买新柱后一定要仔细阅读说明书，确认柱的使用条件以及清洗再生步骤，按照说明书条件测试色谱柱柱效，记录使用压力??定期检测柱压和柱效??不同流动相之间转换时应注意溶剂的互溶性??确认样品不会在流动相中析出或带有固体不溶物，请使用0.45um或0.22um的一次性滤膜过滤样品，或者进行前处理。??为了延长色谱柱使用寿命，请使用保护柱。??定期用合适的溶剂清洗或再生色谱柱??长期不用时，清洗干净后，使用柱子说明书中指明的溶剂保存。柱子要从仪器上卸下并用堵头密封后保存。??定期用合适的流动相清洗保存的柱子，避免干涸。第101页,共111页，2024年2月25日，星期天色谱柱易出现的问题谱图分叉柱头塌陷?第102页,共111页，2024年2月25日，星期天修补前后现象132132第103页,共111页，2024年2月25日，星期天样品问题2431第104页,共111页，2024年2月25日，星期天常见问题及解决方法现象原因解决办法峰型不好（分叉、拖尾、前伸）柱头塌陷、保护柱和柱子不匹配、污染见资料压力升高管路、保护柱、柱子堵塞见资料压力过低漏液气泡见资料压力波动气泡见资料资料第105页,共111页，2024年2月25日，星期天色谱柱子污染对比正常污染后第106页,共111页，2024年2月25日，星期天色谱柱的修复第107页,共111页，2024年2月25日，星期天柱头塌陷修复办法拧下柱头螺帽(最好在台虎钳上)用尖针轻轻除掉柱头表面的污染填料取少量与色谱柱相同的新填料,调成浆糊状(正相用正己烷,反相用甲醇)填实柱头(轻轻下压)更换柱头过滤板,将柱头螺帽拧紧第108页,共111页，2024年2月25日，星期天液相色谱柱再生反相色谱柱用以下溶剂至少各25mL冲洗色谱柱(分析柱)不含缓冲盐的流动相100%甲醇100%乙腈75%乙腈+25%异丙醇100%异丙醇100%二氯甲烷100%正己烷100%异丙醇100%甲醇冲洗色谱柱要用比流动相更强的溶剂第109页,共111页，2024年2月25日，星期天液相色谱柱再生正相色谱柱用以下溶剂至少各50mL冲洗色谱柱(分析柱)50%甲醇+50%三氯甲烷100%乙酸乙酯第110页,共111页，2024年2月25