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常用蛋白纯化技术

陶雪莹

食品学院

蛋白质纯化

总目标：增加蛋白制品的纯度或比活

蛋白质的粗分级

等电点沉淀法

蛋白质的细分级

盐析法

离子交换层析法

有机溶剂沉淀法

凝胶过滤层析法

亲和层析

Fractionalprecipitationofproteins

Precipitate

Discardpellet

contaminants

Addprecipitant,

centrifugation沉淀，去上清，重悬Chromatography

PrecipitateDiscardsupernatant,

proteinofinterestresuspendprotein

Chromatography

离子交换层析（Ionexchangechromatography）

凝胶过滤层析（Gelfiltrationchromatography）

亲和层析（Affinitychromatography）

Ionexchangechromatography

根据蛋白质所带电荷不同，洗脱液离子交换

能力不同纯化蛋白。

带电荷多的蛋白质与树脂结合较强，而带正电

荷少的蛋白质结合较弱。

不同浓度的离子洗脱液进行梯度洗脱，通过离

子交换作用，分离蛋白质。

Ionexchangechromatography

1.Equilibration

2.Sampleapplicationandwash

3.Elution

4.Regeneration

Gelfiltrationchromatography

分子筛层析

介质是由交联葡萄糖、琼脂糖或聚丙烯酰胺形成

的凝胶珠。凝胶珠的内部是多孔的网状结构。

Gelfiltrationchromatography

Affinitychromatography

•吸附层析，依赖于蛋白质和它的配体（ligand）

之间的相互作用来分离的。

当蛋白质混合物通过亲和层析柱时，只有靶蛋白可以

特异地与基质结合，其它没有结合的

蛋白质首先被洗脱；靶蛋白在含有高

浓度自由配体的溶剂洗下

配体

Affinitychromatography

混合蛋白平衡液含配体溶液

样品

目的蛋白

其他蛋白

谢谢！