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纤维素酶活性测定

技术报告NERL/TP-510-426282008年1月实

验室程序分析发行日期：1996年8月12 日

B. 阿德尼和J. 贝克

科罗拉多州科尔大道戈尔登国家可再生能源实验室1617，80401-3393303-275-3000?美国能源部办公室的能源效率和可再生能源由中西部研究所?巴特尔主持。合同号：DE-

AC36-99-GO10337

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予的权利，没有任何费用或成本，除提供，商业销售，无论任何目的，不得使用，复制，修改，改变，提高和分发这些方法，这整个通知包这些标准的生物分析方法是由美国国家可再生能源实验室提供，这些方法由美国中西部研究所为能源部（“核磁共振”）操作。获得和使用这些方法不得对用户的以下义务负责：该用户被授

予的权利，没有任何费用或成本，除提供，商业销售，无论任何目的，

不得使用，复制，修改，改变，提高和分发这些方法，这整个通知包

括在所有方法的副本。此外，用户同意信贷国家再生能源实验室

体的产品或商业机构的书面许可，必须是从国家再生能源实验室（MRI）在任何出版物涉及这些方法的使用。通过国家再生能源实验室（MRI）检查，但不得用于任何广告或宣传或推广，除非有具

体的产品或商业机构的书面许可，必须是从国家再生能源实验室

（MRI）通过检查的。用户还了解到，国家再生能源实验室（MRI）是没有义务提供任何支援，咨询，培训或任何形式的援助给客户，对

于这些方法的使用或提供任何更新，修订或新版本也没义务给客户。

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担保。任何情况下，国家再生能源实验室（MRI）检查均不对任何这些方法是由国家再生能源实验室磁共振成像“原样”

担保。任何情况下，国家再生能源实验室（MRI）检查均不对任何

特殊、间接或间接损害或任何赔偿责任，包括但不仅限于数据或利润

的损失请求权，这结果可能在合同中出现疏忽或其他侵权索赔行动而

的损失请求权，这结果可能在合同中出现疏忽或其他侵权索赔行动而

引致的或与访问所导致的使用或执行相关的这些方法。

纤维素酶活性测定

1。简介

技术报告

1.1

1.1下面的方法介绍了纤维素酶的活性测定过程采用国际纯粹化学与

应用化学的指导方针。该过程已被设计用来测量在“过滤条件下纤维素酶的活性单位”（FPU）的原始酶液。对于酶制剂的定量结果进行

比较，必须在此基础上进行重要的和平等的转换。2.0毫克血糖的价

值相当于从50毫克的过滤纸在60分钟（4％的转换）已被指定为计算所的IUPAC的滤纸纤维素酶单位（FPU）的拦截的还原糖。

1.2这是极为重要的一点，要记住：FPU的定义只是在这个意义上的转换。还原糖产量不是在检测的混合物中线性函数酶的数量，而是由高斯讨论（1987年），两倍的酶不会在相等的时间被预期得到两倍还原糖的产率。因此该检测程序需要找到一种稀释原始的酶原料，比如一个0.5毫升稀释液在60分钟内稀释催化4％（或者，在实践中，发现两个稀释支架上的4％转换点，使之密切合作，所需的稀释可以

得到合理的精度，有插值），然后计算符合稀释要求原活动（浮点运算单元/毫升）。进一步评价所需的计算，其重要意义，要在附录中找到。

1.3

1.3测定混合物时，可能在某些情况下含有还原糖与底物蔗糖水解酶。

将发酵液的检测纤维素酶可能含有营养糖，纤维素和还原端基体聚合物的有时在任何酶的攻击下是可以衡量葡萄糖的量。出于这个原因，

控制包括酶无需底物和酶的底物，不包括所有酶检测值与样品空白值的任何修正。

2。范围

2.1

2.1本程序只用于浮点运算单元，在一个适当的活性中，测定纤维素

酶的制备过程的IUPAC定义如上所述。

3。参考文献

3.1高斯，T.K.1987。“测量纤维素酶的活动。”纯净代谢。化学。59：257-268。3.2米勒，G.L.1959“利用二硝基水杨酸试剂测定还原糖。”分析化学。31:426-428。

4。意义和使用

4.1这个步骤根据IUPAC（国际理论和应用化学联合会）理论，决定了在纤维素酶的准备工作中酶活动的滤纸功效。

5。装置设备

保持在500C范围内的水浴。

能测量540nm吸光度的分光光度计。

6。试剂和反应物

蒸馏水1416ml

二硝基水杨酸10.6g

氢氧化钠19.8g

混合溶解上述物质，然后添加罗谢尔盐306g

苯酚7.6ml（在500C时溶解）焦亚硫酸钠8.3g

将3ml样品混合着0.1N盐酸滴到酚酞的末端，它将需要5-6ml盐酸，如果需要，添加氢氧化钠。

柠檬酸盐缓冲溶液：对于里氏木霉纤维素酶，在PH值为4.8的0.0