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RhD阴性确认试验

1原理

由D原位点数减少或原结构产生变异所产生的一些弱D和不完全D红细胞，它

们虽然有RhD原，但与常规使用的D定型试剂不凝集或弱凝集。确定这些红细胞上

是否有D原存在需进一步采用含IgGD体的试剂进行球蛋白试验以提高试验灵

敏度，达到检测弱D的目的，以及采用不同D表位的D体，测定37种D表位中

的不同D表位，达到检测不完全D表型的目的。当确定红细胞上无D蛋白表达时，才能

最终判定被检标本为RhD阴性。

2试剂与材料

D定型试剂；IgM+IgGD；人球蛋白试剂，多特异性球蛋白或IgG；IgG

致敏红细胞；2～5%受检者的红细胞。

3方法

3.1在1支标记的干净试管中加入1滴IgM+IgGD，在第2支试管中加入1滴合

适的对照试剂；

3.2在2支试管中各加入1滴2～5%受检者的红细胞悬液；

3.3混匀，并在37℃孵育15～30分钟(根据试剂说明书)；900～1000g离心15～

45秒；

3.4轻轻重新悬浮细胞扣并观察凝集反应，如受检红细胞与D管凝集而与试剂对

照管不凝集，可记录受检标本为阳性结果，不必作球蛋白试验；

3.5如不凝集，则用大量盐水洗涤细胞3～4次；最后一次洗涤后，把盐水倾倒干净，

吸干试管边缘；

3.6加1～2滴人球蛋白试剂(根据试剂说明书),轻轻混匀，并以900～1000g离

心15～30秒；

3.7轻轻冲洗悬浮细胞扣并观察凝集反应；

3.8如果试验为阴性，加入已知IgG致敏红细胞，再次离心，检查凝集。

4结果判读

4.1D试管出现凝集而对照管无凝集时，是阳性结果，判为RhD阳性；

4.2D试管无凝集反应者是阴性结果，表明红细胞没有D原，判为RhD阴性；

4.3如果试剂对照管凝集，则不能对这次RhD阴性确认试验作出有效的解释，这种

情况下，对择期受血者，在RhD血型未确定前，应先输RhD阴性血液；如果受检细胞是

献血员，该血液不应用于床。

5注意事项

5.1确认试验中所选用的IgM+IgGD单克隆体所识别的D表位应与初筛使用

的IgMD识别的D表位不同。

5.2本项试验中所检出的不完全D表型的进一步分类需使用特殊的不完全D诊断试

剂。

5.3可采用检测RhD基因的方法诊断RhD血型。