大肠菌群的MPN法检测 PPT (1).ppt

食品微生物检验食品微生物检验技术大肠菌群的MPN法检测

知识目标素质目标技能目标教学目标1.了解大肠菌群的概念；2.掌握大肠菌群的MPN计数法的操作流程及数据处理。1.树立食品安全社会责任感2.强化遵纪守法的法治意识3.培养严谨细致、精益求精的工匠精神4.培养团结协作，爱岗敬业职业精神5.培养规划思维和精益思维1.依据GB4789.3-2016熟练绘制大肠菌群MPN检验法思维导图；2.协作完成大肠菌群MPN检验法；3.独立设计不同食品样品大肠菌群MPN检验法测定试验方案。

讨论：大肠菌群含量超标对身体有什么危害？案例导入

案例分析某屠宰场检验部门对当天的新鲜肉进行大肠菌群的检测，要求检测方法依据国家标准进行。讨论：1、什么是大肠菌群？2、大肠菌群的检测意义？

案例分析认识大肠菌群

案例分析认识大肠菌群定义：大肠菌群系指一群需氧和兼性厌氧，在37℃经24h能发酵乳糖产酸、产气的革兰氏阴性无芽孢的杆菌。意义：1、作为食品受到粪便污染的指示菌。2、作为肠道病原菌污染食品的指示菌。3、作为是评价食品卫生质量的重要指标之一

检验依据

检验依据适用于测定菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数第一法大肠菌群MPN计数法

检样25g（mL）样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择2个～3个适宜稀释度的样品均液，接种LST肉汤管36℃±1℃48h±2h36℃±1℃48h±2h检验程序不产气产气BGLB肉汤不产气产气产气查MPN表大肠菌群阳性大肠菌群阴性报告结果

实验器材、试剂的准备知识点一500mL烧杯3个：配制生理盐水、LST肉汤、BGLB肉汤；锥形瓶1个：装225mL0.85%无菌生理盐水；液体样品：25mL1支、1mL4支（灭菌）移液管10mL3支固体样品：1mL4支（灭菌）10mL3支试管21根：3根生理盐水、9根LST肉汤、9根BGLB肉汤；小倒管18根：9根LST肉汤、9根BGLB肉汤；

实验器材、试剂的准备知识点一

实验器材、试剂的准备知识点一称取NaCl2.55g，加入300mL蒸馏水，量取225mL分装于锥形瓶中，分别移取9mL到4支试管中，121℃高压灭菌15min。1.无菌生理盐水配制

实验器材、试剂的准备知识点一2.LST肉汤配制按配方要求，分别称取适量样品，溶解于150mL蒸馏水中，调节pH至6.8±0.2。分装至装有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。排气、包扎，121℃高压灭菌15min。

实验器材、试剂的准备知识点一3.BGLB肉汤配制按配方要求，分别称取适量样品，溶解于150mL蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5。分装至装有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。排气、包扎，在121℃高压灭菌15min。

梯度稀释及LST接种知识点二36℃±1℃培养箱培养48h±2h。梯度稀释及接种操作前，用镊子取酒精棉球消毒桌子、消毒手用拍击式均质器拍打2min。在天平上称取25g样品+225mL灭菌生理盐水在天平上称取25g样品+225mL无菌生理盐水

梯度稀释及LST接种知识点二用拍击式均质器拍打2min样品梯度稀释与LST接种

BGLB肉汤接种知识点三观察LST管产气量，多则可以使发酵套管充满气体，少则产生比小米粒还小的气泡。如果对产酸但不产气的试管有疑问，可以轻轻拍打试管壁，看有没有气泡上升，若有就需要接。操作前，用镊子取酒精棉球消毒桌子、消毒手BGLB肉汤接种36℃±1℃培养箱培养48h±2h。观察产气现象。

BGLB肉汤接种知识点三观察LST管产气量，有气泡就需要接BGLB肉汤进行复发酵。BGLB肉汤接种36℃±1℃培养箱培养48h±2h。观察产气现象。

结果判断知识点四观察产气情况，产气者，记为大肠菌群阳性管。

大肠菌群MPN报告知识点五阳性管数MPN95%可信限阳性管数MPN95%可信限0.100.010.001下限上限0.100.010.001下限上限000＜3.0--9.5220214.5420013.00.159.6221288.7940103.00.1511222358.7940116.11.218230298.7940206.21.218231368.7940309.43.638300234.6941003.60.171830138821.3183026417180102113.6383104391801107.41.32031175172001