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顶羽菊检测鉴定方法

4范围

本文件描述了顶羽菊的形态学和分子生物学检测鉴定方法。

本文件适用于顶羽菊的检测鉴定。

5规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

6术语、定义和缩略语

6.1术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

总苞involucre：生于花序下或花序每一分枝下或花梗基部下的变态叶称为苞片，当多枚苞叶成轮状

紧密包围花序时称总苞。

单性花unisexualflower：一朵花中只有雄蕊或雌蕊的花。

管状花：花冠连合成管状，缘部5裂，少4裂。

连萼瘦果cypselae：干的单种子果实。

3.2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonuleicacid）

ITS：核糖体DNA内转录间隔区1和内转录间隔区2，以及5.8S核糖体基因（internaltranscribedspacers

1and2andtheintervening5.8Sribosomalgene）

PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）

实时荧光PCR：实时荧光聚合酶链式反应（Real-TimePolymeraseChainReaction）

EmDEA：酶介导双重指数扩增（Enzymes-mediatedDuplexExponentialAmplification）

7顶羽菊分类信息

学名：Rhaponticumrepens(L.)Hidalgo

异名：Acroptilonrepens(L.)DC.,CentaurearepensL.

中文名：顶羽菊（匍匐矢车菊）

分类地位：菊科（Compositae），漏芦属（Rhaponticum）。其它基本信息见附录A。

8方法原理

植株、花序、花、瘦果等形态特征是鉴定该属种类的主要依据；ITS序列、实时荧光PCR、EmDEA

是基于形态学准确鉴定的凭证标本和样品基础上，开发的分子生物学检测方法。

当植物体组织完好，且具备花、果等繁殖器官，可仅采用形态学鉴定。

当送检样品是植株幼苗、叶片、不完整的花或果实等植物组织时，需采用形态学和分子生物学相结

2

合的方法。

6器具和试剂

6.1仪器

体视显微镜、电子天平（感量0.001kg，0.001g）、液氮罐、纯水机、水浴锅、高压灭菌器、高温干

燥箱、离心机、电泳仪、PCR仪、实时荧光PCR仪、核酸浓度检测仪、荧光恒温检测仪等。

6.2用具

解剖针、放大镜、直尺、镊子、培养皿、样品袋、标签、记录纸、标本瓶、标本盒、可调移液器（1000

μL，200μL，100μL，20μL，10μL，2.5μL）、可调移液器枪头等。

6.3试剂

干燥剂、防虫剂、植物基因组提取试剂盒，PCR、实时荧光PCR、EmDEA反应体系常用试剂等。

7检测与取样

7.1监测现场

在检疫现场采集植株鉴定用样品，要求植株完整，形态学特征完好。花部鉴定用样品，要求处于果

实成熟期、外型完整。种子鉴定用样品，要求发育成熟、籽粒饱满、外型完好。

7.2植物产品

将现场检疫抽取的送检样品充分混匀，制成平均样品。采用四分法，视样品多少取平均样品的二分

之一至四分之三（较少样品时）作为试验样品，称取其重量并记录，每份试验样品不少于1kg，剩余的

平均样品加贴标签作为保留样品保存。送检样品不足1kg的全部检测。

8样品制备

8.1形态学

8.1.1植株

在解剖镜或放大镜下镜检。进行植株花部特征和胞果内部特征观察时，辅以解剖刀、解剖针等工具。

8.1.2瘦果

混杂于植物原粮和种子中的菊科胞果或种子，一般在孔径为10mm筛下物中获得。当样品量少时，

也可将全部样品放入白瓷盘中进行人工挑检。

8.2分子生物学

将待测疑似顶羽菊植物的半粒瘦果、微量干燥或新鲜叶片、微量种子或植物组织粉末置于1.5ml或

2ml离心管中，加入至少45μL裂解液，室温静置2min以上，或95℃加热2min至10