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乳酸菌菌种的别离筛选方法

乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌，杆状

或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。营养要求高，需要提供丰富的肽类

氨基酸维生素。在琼脂外表或层形成较小的白色或淡黄色的菌落。

通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳

杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。

乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。当乳杆菌仅是复杂区系中的局部菌类

时，SL培养基常用作为选择性培养基。对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球

菌有TYC培养基、MS培养基。M17培养基被用作乳球菌的别离培养基。

嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无

鞭毛。粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。

乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，

一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。

在MRS培养基上菌落小，呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。

乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以别离时先富集培养并

选择适宜的培养基。别离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也

常常参加醋酸盐，因醋酸盐能抑制局部细菌生长，对乳酸菌无害。

培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为别离鉴别的

依据，通过对生成的乳酸量进展性能鉴定。

乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比拟小。别离培养

基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。也常常

添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。

一.筛选方法：

1.溶钙圈法：

利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些

产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。

其中培养基中参加CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，

以维持培养基的PH。

筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择适宜的稀释度涂布→37℃培养

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48h→挑选产生溶钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色，经镜

检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。

2.溴甲酚绿指示剂法：

培养基：MRS培养基〔含溴甲酚绿酒精溶液〕

筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长出菌落，挑取使溴甲酚绿变色的菌落。

二.菌种的别离筛选

1.培养基：

*1.1麦芽汁碳酸钙培养基：麦芽汁〔10B*〕1L预先灭菌碳酸钙5-10g/LPH

自然〔别离用〕

**1.2牛肉膏10g/L蛋白胨10g/L酵母膏10g/L番茄汁200g/L葡萄糖

10g/L吐温0.05%CaCO315-20g/L溴甲酚绿0.01%PH6.0-6.5〔别离用〕

*1.3番茄汁碳酸钙培养基：

酵母膏7.5g/L葡萄糖10g/L番茄汁100mL蛋白胨7.5g/LKH2PO42.0

g/L吐温0.5mLPH6.0-6.5〔别离用〕

1.5蛋白胨8-10g/L酵母膏3-5g/L葡萄糖13-15g/LKH2PO41.5-

2.0g/L

MgSO0.3-0.5g/LMnSO

44

1.6蛋白胨0.8-1.0g/L糖蜜3.0-5.0g/L酵母膏3-5g/L玉米浆0.5-

1.0g/L

KH2PO40.1-0.3g/LMgSO0.3-0.5g/LNaC13-5g/L葡萄糖8-10g/L

4

PH5.5-6.5