动物血清学检验技术（动物疫病检验课件）.pptx

血清学检验技术概述;1;血清学反应的概念、类型;血清学反应的概念;血清学反应的类型;一级血清学试验;;血清学反应的一般特点;(一)特异性与交叉性;;;;;抗原与抗体最适比例与带现象;血清学反应的影响因素;;血清学反应的应用

和发展趋向;;;凝集反应概述

;1;凝集反应的概念;凝集反应的概念;凝集反应的原理;通常细菌和红细胞等颗粒性抗原在悬液中带弱负电荷，周围吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松散的负离子层，构成一个双离子层，使颗粒相互排斥。

在有电介质存在的条件下，当特异抗体与相应抗原颗粒互补结合时，抗体的交联作用克服了抗原颗粒表面的电位，而使颗粒凝集在一起。;凝集反应的发生分两阶段

抗原抗体的特异结合。

在电解质的参与下，出现可见的凝集颗粒。;凝集反应的分类;直接凝集试验

细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。;试管凝

集试验;乳胶凝集反应

将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，出现的特异性凝集现象。;正向间接凝集反应;反向间接凝集反应

用特异性抗体致敏载体以检测标本中的相应抗原。;;凝集反应的分类;乳胶凝集试验

乳胶又称胶乳，是聚苯乙烯聚合的高分子乳状液，乳胶微球直径约0.8um，对蛋白质、核酸等大分子物质具有良好的吸附性能。

用它作载体吸附抗原（或抗体），可用以检测相应的抗体（或抗原）。

本法具有快速简便、保存方便、比较准确等优点。;协同凝集试验;桥梁凝集试验;沉淀试验概述;1;沉淀试验概念;;沉淀试验的分类;;;;利用可溶性抗原与抗体在半固体琼脂内进行扩散，若抗原与抗体对应，并且比例适当，就会出现白色沉淀线，此为阳性反应。

分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验两类。;单向琼脂扩散试验

本试验主要用于检测标本中各种免疫球蛋白和血清中各种补体成分的含量，敏感性很高。;双向琼脂扩散试验

本法主要是用于检测血清中各种免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙肝表面抗原等。缺点是需要时间过长，灵敏度不高。;将琼脂内电泳和凝胶内沉淀反应相结合。

具有分辨率高，灵敏度高，时间短，是很理想的分离和鉴定蛋白质混合物的方法。用于抗原、抗体定性及纯度的测定。

临床上常见的是对流免疫电泳和火箭免疫电泳。;对流免疫电泳

本法比琼脂扩散法的灵敏度要高10～16倍，而且反应时间短，可用于各种蛋白的定性和半定量测定。;火箭免疫电泳

当抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰，峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关。;补体结合试验概述;1;认识补体系统;;补体的激活;;;;补体结合试验具有高度的特异性和一定的敏感性，是诊断人畜传染病常用的血清学诊断方法之一。;中和试验概述;1;中和试验的概念;;;;中和试验的分类;;用于检出病料中的病毒，亦可进行初步鉴定或定型。

先根据病毒易感性选定试验动物及接种途径。将病料研磨，并稀释成一定浓度。

污染的病料需加抗生素，或用细菌滤器过滤，与已知的抗血清等量混合，并用正常血清加稀释病料作对照。混合后置37℃1h，分别接种实验动物，每组至少3只。分别隔离饲喂，观察发病和死亡情况。对照动物死亡，而中和组动物不死，即证实该病料中含有与该抗血清相应的病毒。

本法亦可用于毒素的鉴定和分型。;本法多将病毒作10倍递增稀释，分置2列试管，第一列加正常血清(对照组)，第二列加待检血清(试验组)。

混合后，置37℃作用1h，将各管混合液分别接种选定的试验动物，每一稀释度用3-5只动物。

接种后，逐日观察，并记录其死亡数，观察结束后，计算LD50和中和指数，本法适用于大量样本的检测。

对病毒而言，通常中和指数大于50者判为阳性，10-49为可疑，小于10为阴性。;本法用以测定抗病毒血清的中和价.

将待检血清2倍递增稀释，加等量已知毒价的病毒液(与血清混合后，每一接种剂量含病毒100LD50)，摇匀后，置37℃作用1h，接种实验动物后观察。;先将病毒稀释成适当浓度，使每0.2ml含80个-100个PFU(空斑形成单位)，与不同稀释度的待检血清等量混合，置37℃作用1h-2h；

分别测定PFU，使空斑减少50%血清稀释度即为该血清的中和价。;免疫标记技术概述;1;免疫标记技术的概念;;免疫标记技术的分类;;放射物标记分析

用放射物标记抗原或抗体发展的放射免疫分析，该技术利用核素标记物的放大效应，改善了待测物的检测下限，同时以抗体或抗原作为结合试剂，大大提高了检测方法的特异性，缺点是对环境造成污染。;荧光标记分析

所用标记物是荧光素和荧光染料，是将抗原或抗体标记以荧光物质与相应抗原或抗体结合，在荧光显微镜或紫外线照射下，检测荧光强度和荧光现象的一种检测方法。荧光标记免疫法灵敏