琼脂糖凝胶电泳.pptx

种子生产与经营专业教学资源库;主要内容;一、实验目的

学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法，并掌握检测DNA的纯度、浓度与分子量的方法。

;二、实验原理

琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔行滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。

DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。

;三、实验材料

（一）材料

试验提取的植物DNA。

（二）试剂

琼脂糖、10xTBE电泳缓冲液。10x载样缓冲液、EB母液（0.5mg/ml）、λDNA(HindⅢ）。

;（三）仪器与用具

微波炉，电泳仪，微型电泳槽，凝胶成像系统、微量取液器、吸管头若干、加样板、量筒、三角瓶、透明胶带。

;四、实验步骤

（一）、制胶

1、称取1g琼脂糖加入盛有100ml0.5×TBE电泳缓冲液的5000ml三角瓶中，摇匀，用电子天平称三角瓶的总重量。在微波炉或者电炉上加热至琼脂糖完全溶解。冷却到约60℃后，加入5ul的Goldview（终浓度0.5ug/ml），并摇匀。

2、插入适当的梳子到制胶板，将溶解的琼脂糖倒入其中，直至厚度约4-6mm。

;3、冷却至室温。

4、充分凝固后拔出梳子，要保证点样孔完好。

5、将凝胶放入电泳槽中，加电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2mm。

;（二）点样

1xTE或ddH2O:7μL

10ul混合液10xloadingbuffer:1ul

样品:2ul

混合后点入点样孔中。其中最左边的两个孔点5ulMarker3

作为分子量标准。

（三）电泳

打开电源开关，调节电压至3-5v/cm即100V，可见溴酚蓝

条带由负极向正极移动，约一小时可观察。

;（四）观察

用凝胶成像系统观察电泳好的凝胶，打开紫外灯，可以看到橙红色核酸条带，根据条带的粗细和荧光强度，可粗略估计样品DNA的浓度。同时根据已知标准DNA的分子量，通过线性DNA条带的位置初步估计样品分子量。

;五、实验注意事项;谢谢观看