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Dab2下调及异常甲基化促进肺癌的发生发展的开题报告

一、选题背景与意义

肺癌是近年来世界上死亡率最高的肿瘤疾病之一，其发病机制复杂，存在多种相关分子机制。近年来的研究表明，DNA甲基化参与了肺癌的起始和发展过程，并且DNA甲基化异常是肺癌的基本遗传学特征之一。另外，Dab2作为一个细胞信号传递蛋白，它在肺癌的发病与发展中也发挥着关键的作用。而目前对于Dab2及其调控DNA甲基化在肺癌中的作用研究还比较匮乏。因此，本研究将探讨Dab2下调及异常甲基化对于肺癌的发生发展的影响机制，以期为肺癌的防治提供基础研究支持。

二、研究内容

本研究将通过以下几个方面来探讨Dab2下调及异常甲基化在肺癌发生发展中的作用：

1.采用RT-PCR和Westernblot等方法检测Dab2在肺癌组织及细胞系中的表达水平，同时检测Dab2调节DNA甲基化的可能性。

2.采用甲基化靶向树突状DNA技术对Dab2的甲基化水平进行检测，进一步明确Dab2的甲基化模式是否参与了肺癌的发病与发展。

3.通过细胞生物学实验检测Dab2与DNA甲基化的关系对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响，探讨Dab2及DNA甲基化在肺癌中的作用机制。

三、技术路线

1.实验材料

a）肺癌细胞系：A549、H1299、H1975等

b）肺癌组织及癌旁组织标本

2.实验方法

a）细胞培养及转染

采用DMEM培养细胞，分别转入siRNA和甲基化靶向树突状DNA。采用Westernblot及RT-PCR检测转染效率。

b）甲基化靶向树突状DNA技术

采用具有甲基化靶向序列的树突状DNA，能够靶向甲基化序列，并利用反式转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行检测。

c）免疫印迹和定量PCR

采用Westernblot检测样本中Dab2的表达水平；采用实时荧光定量PCR确定样本中Dab2的mRNA表达水平。

d）细胞实验

包括细胞增殖、迁移和侵袭能力的实验。

四、预期结果

通过本研究，预期将获得Dab2在肺癌组织及细胞中的表达及甲基化水平，进一步探讨Dab2及DNA甲基化在肺癌中的作用机制。同时，本研究也将有助于深入理解肺癌的分子机制，为肺癌的治疗与预防提供有效的科学依据。