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临床免疫检验常用的分析技术
临床免疫检验中常用的分析技术
一、免疫标记技术：两种分类
1.免疫组织化学技术（免疫组化技术）：用于在组织切片或其他标本中定位抗原和抗体。
2.免疫测定（免疫分析）：用于液体标本中测定抗原或抗体。
分类包括免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免疫技术、金标技术以及化学发光技术。
酶免疫技术——包括固相酶免疫技术，其中最常用的是酶联免疫吸附测定（ELISA）。
ELISA方法类型及操作步骤
双抗体夹心法：是检测抗原最常用的方法。
操作步骤如下：（1）将特异性抗体包被在载体上形成固相抗体。（2）洗去未结合的抗体和杂质。（3）加入待测样品，使其中的相应抗原与固相抗体特异性结合成复合物。（4）再次洗涤除去未结合的物质。（5）加入酶标抗体，使其与固相上的抗原特异性结合。（6）经充分洗涤后除去未结合的游离酶标记抗体。（7）加入相应酶的底物，固相上的酶催化底物变成有色产物，颜色反应的程度与固相上的抗原量有关。
适用范围：双抗体夹心法是检测抗原的最常用方法，适用于具有至少两个结合位点的抗原，因此不适用于半抗原物质的测定。
2、竞争法：可用于测定抗原或抗体。
操作步骤如下：（1）将特异性抗体包被在载体上形成固相抗体，然后洗去杂质。（2）在待测孔中同时加入待测标本和酶标记抗原，使其与固相抗体反应。如果待测标本含有抗原，则与酶标记抗原共同竞争结合固相抗体。待测标本中抗原量越多，酶标记抗原结合量越少。（3）洗涤除去游离酶标记物后，加入底物显色。（4）对照孔中不含受检抗原，其结合的酶标记抗原最多，显色最深。对照孔与待测孔颜色深度之差代表受检标本中的抗原量。待测孔越淡，标本中抗原量越多。
3、间接法：可检测各种相应抗体。
操作步骤如下：（1）将特异性抗原包被在载体上形成固相抗原。（2）洗去未结合的物质，然后加入待测样品，使其中待测的特异性抗体与固相抗原结合形成固相抗原-抗体复合物。（3）再次洗涤后，固相上仅留下特异性抗体。（4）加入酶标抗人球蛋白（酶标抗体），使其与固相复合物中的抗体结合，从而使待测抗体间接标记上酶。（5）洗涤除去多余的酶标抗体，固相结合酶量即代表待测抗体的量。（6）最后加入底物显色，其颜色深浅可代表待测抗体量。
免疫荧光法——用于抗核抗体的检测
二、沉淀反应
可溶性抗原与相应抗体特异性结合所产生的反应。反应分为两个阶段：（1）抗原-抗体特异性结合；（2）形成可见的免疫复合物。
三、凝集反应
细菌和红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集(agglutination)现象。
凝集反应的发生分为两个阶段：(1)抗原抗体的特异结合;(2)出现可见的颗粒凝聚。
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