DB32_T 4727-2024 鳜鱼传染性脾肾坏死病诊断及综合防控技术规程.docxVIP

ICS?65.150

CCS?B?52

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DB32/T?4727—?2024

m鳜鱼传染性脾肾坏死病诊断及综合防控

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技术规程

TECHNICAL?CODE?OF?PRACTICE?FOR?THE?DIAGNOSIS，?PREVENTION，?AND

CONTROL?OF?INFECTIOUS?SPLEEN?AND?KIDNEY?NECROSIS?IN?MANDARIN?FISH

2024-04-03?发?布 2024-05-03?实?施

江苏省市场监督管理局 发布

DB32/T?4727—2024

前 言

本文件按照?GB/T?1.1—2020《标准化工作导则第?1?部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由江苏省农业农村厅提出。

本文件由江苏省渔业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：扬州大学。

本文件主要起草人：张晓君、高晓建、姜群、刘晓丹、朱鑫海、姜姿妍、周一凡。

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Ⅰ

mDB32/T?4727—2024

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鳜鱼传染性脾肾坏死病诊断及综合防控

技术规程

1?范围

本文件规定了鳜鱼传染性脾肾坏死病的诊断、综合防控和记录。

本文件适用于鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的检测以及鳜鱼传染性脾肾坏死病的诊断和综合防控。

2?规范性引用文件

下?列?文?件?中?的?内?容?通?过?文?中?的?规?范?性?引?用?而?构?成?本?文?件?必?不?可?少?的?条?款?。?其?中?，注?日?期?的?引?用?文

件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB?11607渔业水质标准

SC/T?7103水生动物产地检疫采样技术规范

3?术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4?诊断

4.1?现场调查

水质情况包括水源、水色、水温、透明度、PH、亚硝酸盐、氨氮、溶解氧、硬度等?；养殖情况包括养殖密

度、苗种来源、饵料鱼来源等。

4.2?临床诊断

患病鱼表现为沿池边漫游而死，鳃盖、口腔周围、下颌、胸鳍、腹鳍充血，鳃发白，解剖后肝脏呈现白色

或有出血点，肾脏和脾脏肿大或有明显的出血点，部分胆囊肿大，部分幽门盲囊出血（见附录?A?图?A.1）。

4.3?检测方法

4.3.1?试剂材料

试剂材料：

A) 无水乙醇（分析纯）；

B) 三氯甲烷（分析纯）；

C) 异戊醇（分析纯）；

D) 1?MMOL/L?乙二胺四乙酸（EDTA），PH?8.0；

E) 1%?十二烷基硫酸钠（SDS）；

F) DDH2O；

1

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44G) 10?MMOL/L?TRIS?HCL，PH?8.0，?℃保存；

4

4

H) TRIS?饱和酚，?℃保存；

I) 8?U/μL?BST?DNA?聚合酶，-20?℃保存；

J) 10?MMOL/L?DNTPS?混合物（DATP、DTTP、DCTP、DGTP?各?2.5?MMOL/L），-20?℃保存；

K) 10?000×SYBR?GREEN?I，-20?℃保存；

L) 25?MMOL/L?MGCL2，-20?℃保存；

M)?10×LAMP?缓冲液，-20?℃保存；

N) 5?MOL/L?甜菜碱，-20?℃保存；

O) 10×PCR?缓冲液，-20?℃保存；

P) 5?U/μL?TAQ?DNA?聚合酶，-20?℃保存；

Q) 20?MG/ML?蛋白酶?K，-20?℃保存；

R) LAMP?检测引物序列：

5?′5?′F3：?

5?′

5?′

B3：??ATCCGAGGCGACGTCATC?3?′

5?′5?′FIP：?

5?′

5?′

BIP：??AAGCAAGTGCACAGCACCCGTCAAGCCTCGCACAGAGG?3?′

S) 巢氏?PCR?检测引物序列：

5?′5?′5?′5?′

5?′

5?′

5?′

5?′

MCP?R1：??TTACAGGATAGGGAAGCCTG?3?′

MCP?F2：??GCGTTTGATGCGATGGAGAC?3?′

MCP?R2：??ACGGCAGAGACACGGTAGGC?3?′

4.3.2?仪器设备

仪器设备包括：

A）?灭菌锅；

B）?水浴锅；

C）?PCR?仪；

D）?紫外分光光度计；

E）?电泳仪；

F）?电泳槽；

G）?凝胶成像系统；

H）?离心机。

4.3.3?采样

采?集?样?品?的?数?量?见?SC/T?7103。?鳜?鱼?体?表?用?75%?酒?精?消?毒?后?解?剖?剪?解?剖?，无?菌?操?作?，剪?取?小?块?肾

脏、脾脏、肝脏，匀浆后用于?DNA?提取。

4.3.4?检测样本模板制备

1利?用?酚??氯?仿（三?氯?甲?烷）法?抽?提?混?