无菌操作—无菌接种技术（植物组织培养课件）.pptx

无菌操作;【知识点】

掌握无菌接种技术

【技能点】

熟练使用超净工作台与接种器具，会进行初代培养。

素质要求：培养学生无菌意识、创新意识、团队合作意识和生态环保意识；具有任务执行力，规范操作、注意安全；科学严谨、实事求是的工作态度。

;;一、定义;（1）进入缓冲间更换工作服，带上口罩和帽子，换拖鞋，洗手等。;（2）然后进风淋室，对工作人员进行消毒灭菌。（有条件的情况下）;进入接种室打开超净工作台、打开超净工作台的紫外灯，检查仪器表是否正常。;（3）退出接种室后关门，并打开接种室的紫外灯。

（4）脱下工作服、口罩、帽子、拖鞋，退出缓冲间关门并打开缓冲间紫外灯。

（5）等待空间消毒灭菌15-20分钟，期间准备好所有外植体消毒的材料、工具和接种工具。;（6）待空间消毒灭菌时间满后，检查紫外灯是否关闭。

（7）按照步骤（1）、（2）进入接种室。

（8）调整座位高度，以达到舒适度为宜。

（9）消毒工作台，喷洒酒精于工作台上下左右4面，勿喷出风面。

（10）取出酒精棉同一方向擦拭5个面，包括出风口。;（11）打开酒精灯调整灯芯长度为1.5cm。

（12）将用酒精棉擦拭接种工具，后插入消毒器灭菌（300℃）。

（13）其他用具材料带入工作台前先需喷洒酒精消毒，分别放置于工作台面。

（14）点燃酒精灯，消毒双手后开始接种操作。;三、接种技术

超净工作台面灭菌：70%酒精擦洗，并用紫外灯照射20min。

接种物品的灭菌：接种服、帽子、口罩要常清洗、并用紫外线灭菌。双手须用肥皂水洗干净，进行操作前再用70%酒精擦洗双手。;5）上工作台后，用酒精棉球擦拭双手及台面等，包括指甲缝，最后擦拭工作台。;案例分析;（4）接完一瓶用酒精棉擦拭工具插入消毒器灭菌，待消毒时间已满取出冷却，以便循环使用。（一般准备两套接种工具）

（5）接种完毕，清理工作台面，关闭工作台。同时做好标识。

;注意事项：

1）防止交叉污染。左右手不能相互交叉；每切割完1瓶母种材料就更换无菌滤纸；接种工具不能碰到台面；接种工具要全面充分灼烧。

2）在酒精灯火焰的有效范围内操作（直径10cm）。

3）接种人员注意个??卫生，要经常勤剪指甲，穿工作服、戴口罩与帽子，并严格灭菌。;酒精棉球擦拭接种工具，将镊子和剪子从头至尾过火，尖端烧红。最后用高温消毒器。

接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话等。

接种完毕，清理工作台。;接种注意事项

接种用具如刀、剪、镊子每次使用前需灭菌处理，每用一次，需重新灭菌一次。;瓶口要在酒精灯火焰附近打开。如不用酒精灯，需将瓶子倾成斜角操作，并尽量在超净工作台靠近里面位置操作。

手臂勿在培养基、无菌材料、接种器上方经过。;几种接种方式

在瓶中将培养材料剪成若干小茎段，然后用镊子夹出来，直接接种到含有新鲜培养基的容器中。

将培养材料用镊子夹出来，放到无菌的培养皿或培养盘中，用剪子剪成若干小茎段或用长柄解剖刀在无菌培养皿中切割成若干小茎段。

接种外植体时，一个培养瓶中只接种一个外植体，以防互相污染。;小结